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时间:2019-05-15
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1、分类号:R541.9学校代码:10062密级:学号:2012701024博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目:探讨PiC基因在阿霉素所致心肌损伤中的表达及姜黄素的保护作用TITLE:TheStudyofPicGeneinMyocardialInjuryInducedbyAdriamycinandtheMechanismofCurcuminProtection一级学科:临床医学二级学科:内科学心血管病论文作者:卢均坤导师:齐向前教授天津医科大学研究生院二O一七年十一月分类号:R541.9学校代码:10062密级:学号:2012701
2、024学位类߿:科学学位专业学位√学科门类:临床医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目:探讨PiC基因在阿霉素所致心肌损伤中的表达及姜黄素的保护作用TITLE:TheStudyofPicGeneinMyocardialInjuryInducedbyAdriamycinandtheMechanismofCurcuminProtection一级学科:临床医学二级学科:内科学心血管病论文作者:卢均坤指导教师:齐向前教授天津医科大学研究生院二〇一七年十一月天津医科大学博士学位论文中文摘要目的:探讨在阿霉素所致的心肌损伤中PiC的表达情
3、况,利用姜黄素进行干预后心肌细胞损伤的减轻程度及保护机制。方法:一、体外培养大鼠H9c2心肌细胞,给予阿霉素(lµg/ml)刺激,构建心肌细胞损伤模型,共分为4组:对照组、阿霉素损伤1h组、阿霉素损伤3h组、阿霉素损伤6h组。应用MTT和流式细胞仪检测细胞存活情况,GSH、SOD及MDA试剂盒检测细胞内氧化应激水平,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化情况,Real-timePCR检测SLC25a3mRNA表达水平,Westernblot检测PiC蛋白表达水平。二、体外培养大鼠H9c2心肌细胞,给予阿霉素(lµg/ml)刺激,并分߿给予浓度为0、10、12
4、、15mg/L的姜黄素对上述心肌细胞损伤模型进行干预,应用MTT和流式细胞仪检测细胞存活情况,GSH、SOD及MDA试剂盒检测细胞内氧化应激水平,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化情况,Real-timePCR检测SLC25a3mRNA表达水平,Westernblot检测PiC蛋白表达水平。三、选择成年健康的SD大鼠作为动物体内模型,利用阿霉素制作心肌损伤模型。所有SD大鼠按照实验目的分类:1、生理盐水组(对照组),2、阿霉素组,3、姜黄素干预组(同时给予阿霉素)。阿霉素+生理盐水配成浓度为lµg/ml的阿霉素注射液,姜黄素+生理盐水配成浓度为12mg/
5、L的姜黄素注射液。所有大鼠在饲养2周后开始制作动物模型。给药方式:采用鼠尾静脉注射方式给予阿霉素及姜黄素等。对照组:按2.5mL/kg尾静脉注射0.9%氯化钠注射液,1周1次,连续注射6周;阿霉素组:按1.25mg/kg鼠尾静注射0.5mg/mL阿霉素(0.9%氯化钠注射液稀释,约0.5mL),1周1次,给药时间为6周;姜黄素干预组中阿霉素给药剂量与阿霉素组相同,大鼠注射阿霉素后再给予姜黄素(浓度为12mg/mL)按照每公斤体重给予30mg的剂量给药(约0.5mL),前后共6周。注射完药液后,再进行4周的普通饲养,采用脊髓离断法将所有大鼠全部处死,取材进
6、行实验。结果:一、MTT发现阿霉素引起心肌细胞毒性的剂量范围和浓度在24小时的计算IC50是2.47uM(95%可信区间:0.863至7.092)。使用流式细胞仪可见在阿霉素I天津医科大学博士学位论文作用时间1h、3h、6h组的细胞凋亡率均明显高于对照组。随着阿霉素作用时间的延长,H9c2细胞内Gpx活性及SOD活力均明显下降(p<0.01),且MDA量显著升高(p<0.01)。JC-1法检测线粒体膜电位,正常细胞中JC-1很容易进入线粒体并以多聚体的形式存在,发出明亮的红色荧光;在凋亡细胞中,由于线粒体膜电位的崩溃,进入线粒体的JC-1减少,并以发出
7、绿色荧光的单体形式存在。在阿霉素组心肌细胞中JC-1染色呈现绿色说明线粒体膜不稳定,MPTP通透性增高,开放异常,细胞凋亡多。在阿霉素+姜黄素组JC-1染色呈现红色与绿色交织,且红色比率明显多于阿霉素组,说明线粒体趋于稳定,细胞凋亡减少。另外,心肌细胞在给与阿霉素后1h、3h、6h,Slc25a3mRNA的表达量均明显高于对照组,且随阿霉素作用时间的延长Slc25a3基因表达水平呈现递增趋(p<0.01)。与基因表达情况相同,心肌细胞在给予阿霉素后的1h、3h、6h组中PiC蛋白的表达与对照组比较明显升高,且有随阿霉素作用时间的延长,PiC蛋白的表达也呈
8、现出递增趋势。二、MTT法显示培养的心肌细胞对阿霉素的浓度具有剂量依赖性,当培养
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