姜黄素对阿霉素致大鼠心脏毒性的保护作用及机制探讨-论文.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第16期姜黄素对阿霉素致大鼠心脏毒性的保护作用及机制探讨高秋，杨松，陈燕春，季燕妮，周维(宜兴市人民医院，江苏宜兴，214200)摘要：目的观察姜黄素对阿霉素(ADR)致大鼠心脏毒性的保护作用，并探讨其可能的作用机制。方法以ADR诱导大鼠心肌损伤模型，观察不同剂量姜黄素干预对大鼠心肌酶谱指标及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的影响，采用免疫印迹法检测心肌组织中的凋亡相关蛋白Caspase~和Bcl_2。结果姜黄素显著抑制了ADR损伤后大鼠血清心肌酶指

2、标的升高，上调了心肌组织SOD活性和Bcl一2蛋白表达，抑制MDA水平和Caspase一3蛋白表达升高。结论姜黄素对ADR引起的大鼠心肌损伤具有保护作用，该作用与抑制ADR导致的心脏组织氧化应激、进而减轻心肌细胞凋亡有关。关键词：心脏毒性；姜黄素；阿霉素；凋亡doi：10．3969~．issn．1002~66X．2014．16．010中图分类号：R654文献标志码：A文章编号：1002—266X(2014)16-0027~3阿霉素(ADR)属于蒽醌类抗生素，被认为是最准、Westernblot封闭液

3、、一抗稀释液、二抗稀释液和有效的蒽环类广谱抗癌药物之一。然而，ADR在抗BCIP／NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒均来自碧云天肿瘤的同时具有严重的心脏毒性，临床应用受到限生物技术研究所。其他均为AR级化学试剂。实验制⋯。ADR的心脏毒性机制尚未完全明确，然而近仪器：751G．可见紫外分光光度计(上海分析仪器期研究表明l3J，其心脏毒性与心肌组织大量的自厂)，高速匀浆机(上海弗鲁克流体机械制造有限公由基生成和脂质过氧化引起心肌细胞凋亡有关。姜司)，Bio．Radmodel680酶标仪、电泳仪(美国Bio—

4、黄素是从姜科植物姜黄中提取的天然色素，为姜黄Rad公司)。的主要活性成分。姜黄素具有抗炎、保肝利胆、抗血i．2方法脂、抗氧化、抗肿瘤及抗炎等诸多药理作用J。近1．2．1分组与造模将40只大鼠随机分为对照期研究表明，姜黄素对缺血和炎症引起的心脏组、模型组和姜黄素低、中、高剂量组各8只。模型功能损害具有保护作用。2013年5—6月，我们建组和对照组每日给予生理盐水0．02mL／g灌胃，第立大鼠ADR急性心脏毒性模型，检测心脏组织中丙5天分别腹腔注射等量生理盐水、盐酸ADR20mg／二醛(MDA)水平、超

5、氧化物歧化酶(SOD)活性及凋kg。姜黄素低、中、高剂量组造模前分别给予10、亡相关蛋白Caspase一3和Bc1．2水平，以探讨姜黄素20、40mg／kg姜黄素灌胃，1次／d，连续5d；于第5对ADR致心脏损伤的保护作用及机制。天给药1h后腹腔注射盐酸ADR20mg／kg，后继续1材料与方法给药2d。1．1材料普通级雄性SD大鼠，体质量220—2401．2．2血清LDH、CK、CKMB测定造模后72h，g，由徐州医学院实验动物中心提供。药品：姜黄素戊巴比妥麻醉动物，腹腔静脉取血；开胸取出心脏，(S

6、igma公司)，用含6％(体积分数)乙醇和6％(体将心脏组织置于一80℃超低温冰箱中保存待用。积分数)聚乙二醇400的蒸馏水溶解；盐酸多柔米按试剂盒方法，检测血清LDH、CK、CKMB。星注射液(浙江海正药业股份有限公司)，采用生理1．2．3心脏组织中SOD活性及MDA水平检测盐水稀释。试剂：乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、肌酸取心脏组织于冷生理盐水中匀浆，按试剂盒方法进激酶(cK)试剂盒、肌酸激酶同工酶(CK~B)试剂盒行操作，采用比色法检测SOD活性及MDA水平。均购于宁波亚太生物技术公司，SOD试

7、剂盒和MDA1．2．4心脏组织Caspase．3和Bcl-2蛋白检测采试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所；兔抗大用免疫印迹法。提取心脏组织总蛋白，以BCA法进鼠Caspase．3和Bcl一2多克隆抗体购自CellSignMing行蛋白定量。各取100g上清进行SDS．PAGE电公司，BCA蛋白浓度测定试剂盒、蛋白质分子量标泳(浓缩胶50g／L，分离胶150g／L)，100V转移约27山东医药2014年第54卷第16期120min。取转移后的硝酸纤维素滤膜(NC膜)，加表3姜黄素对大鼠心脏组织Cas

8、pase31：10稀释的丽春红储存液，摇床室温缓摇15min，及Bcl-2表达的影响(，l=4，i±)去离子水洗3rain×5次。将膜置入Western封闭液中，室温摇床上缓摇封闭2h，在摇床上快摇洗膜3min×5次。加特异性一抗，兔抗鼠激活型Caspase，3(1：1000)、Bcl-2(1：500)抗体。膜置于一抗中，4cc冰箱过夜孵育，TBST洗膜5rain×3次。分别加注：与对照组比较，P<0．01；与模型组比较，P<0．05，P<特异性二抗，碱性磷酸酶标记的