egcg对戊四氮致痫大鼠的保护作用及机制探讨

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1、河北医科大学博士学位论文EGCG对戊四氮致痫大鼠的保护作用及机制探讨姓名：谢涛申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：王维平201204中文摘要EGCG对戊四氮致痫大鼠的保护作用及机制探讨摘要癫痫是常见的神经系统慢性疾病，全球发病率约为1％。癫痫给社会、家庭、个人带来了沉重的负担。在全球约五千万癫痫患者中，其中约有30％为难治性癫痫，这些难治性癫痫患者中，大部分为颞叶癫痫。癫痫可以导致认知、情感、行为方面异常。据报道，约有半数以上的癫痫患者伴有认知功能障碍。癫痫发作类型、病灶部位及社会心理因素均可

2、影响认知，近几年研究发现抗癫痫药物本身也有导致认知损伤的副作用。因此寻求一种既可以有效抑制癫痫发作同时不会影响认知功能的新型抗癫痫药物成为当务之急。氧化应激参与了许多神经变性疾病的生理病理过程，如肌萎缩侧索硬化(AmyotrophicLateralSclerosis，ALS)、帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)、阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)。近来研究发现氧化应激同样存在于癫痫的发病机制之中。癫痫发作过程伴有氧自由基生成增多，而脑组织抗氧化系统相对薄弱

3、，当自由基的生成超过抗氧化能力时，导致大分子物质如脂类、蛋白和DNA的损伤。在不同的癫痫模型中均证实了氧化损伤的存在。颞Ⅱ十癫痫伴有海马部位神经元损伤，这既是癫痫发作的结果，又可导致潜伏期神经网络环路重建，继而出现反复惊厥发作。氧化应激与产生的大量活性氧簇能通过脂质过氧化反应，激活非选择性钙通道，涮节细胞凋亡相关基因诱导海马神经元发生凋亡。P13K／Akt信号通路具有调节细胞凋亡、增殖、代谢和分化的生理作用，Akt活化对氧化应激诱导的细胞凋亡有很好的保护作用。研究发现抗氧化剂维生素C、维生素E可以有

4、效抑制动物模型中癫痫发作。近年来，具有抗氧化作用的中药单体被广泛用于抗癫痫药物筛选。在动物试验中积雪草(centellaasiatica)、姜黄素(curcumin)、马齿苋(bacopamonnieri)均证明可以有效抑制癫痫发作及减轻氧化损伤。(．)表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin．3一gallate，EGCG)，是绿茶中主要的儿茶素组分，具有抗氧化、抗炎、抗涮亡中文摘要等多种功效。EGCG抑制脂质过氧化功效比维生素E和维生素C分别高16倍和18倍。EGCG可以通过直接

5、作用于自由基、与金属离子络合、激活体内抗氧化酶活性等多种方式起到抗氧化作用。研究发现EGCG可以透过血脑屏障而直接发挥神经保护作用。同时，EGCG可以改善酒精、糖尿病及铅中毒所导致的认知功能损伤，正常大鼠给予EGCG同样可以有效提高认知功能。EGCG还可以对脑缺血、脊髓损伤起到神经保护作用。而EGCG对于癫痫的保护作用未见报道，有鉴于此，本研究通过建立戊四氮(pentylenetetraz010e，PTZ)点燃慢性癫痫大鼠模型，给予EGCG进行干预，观察EGCG对戊四氮致痫大鼠行为学、认知能力及对海

6、马神经元的影响，评价EGCG的保护作用并进一步探讨其可能的作用机制。第一部分EGCG对戊四氮致痫大鼠的抗癫痫作用及机制探讨目的：建立戊四氮(pentylenetetrazoloe，PTZ)点燃慢性癫痫大鼠模型，观察EGCG对戊四氮致痫大鼠行为学的影响及大鼠脑内谷胱甘肽(glutathione，GSH)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)的变化情况，评价EGCG的抗癫痫作用并对其机制进行初步探讨。方法：7．8周龄清洁级健康雄性Sprague．Dawle)髑D)大鼠随机分为五组：模型组(P

7、TZ组)；正常对照组(CON组)；25mg／kgEGCG+PTZ组；50mg／kgEGCG+PTZ组；50mg／kgEGCG组。EGCG和PTZ于每次给药前溶于生理盐水新鲜配制。每日于08：oo—09：oo之间进行药物注射。PTZ组大鼠隔日腹腔注射1％PTZ(35mg／kg)，共13次，注射PTZ前给予O．9％生理盐水3．5ml／kg腹腔注射；CON组大鼠隔日腹腔注射生理盐水3．5ml／kg，共13次；PTZ+25rng／kgEGCG组大鼠除隔口腹腔注射1％PTZ35mg／kg外，每日给予25mg／

8、kgEGCG腹腔注射；PTZ+50mg／kgEGCG组大鼠除隔日腹腔注射1％PTZ35mg／kg外，每日给予50mg／kgEGCG腹腔注射；EGCG于PTZ给药前30分钟腹腔注射；50mg／kgEGCG组：每日给予EGCG50mg／kg腹腔注射。注射结束后观察半小时。行为学分级标准依据Racine分级，分为5级：0级：无任何反应，呈正常的行为状态；1级：湿狗样抖动、面肌痉挛如眨眼、动须及节律性咀嚼；2级：颈部肌肉痉挛表现为点头和(或)甩尾；3级：一侧前肢阵挛；4级：双