米诺环素对戊四氮致痫大鼠海马的保护作用(7266)

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。1研魁签确三一导师签砌警学院领导虢多卜碲年乡月汐旷研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由

2、本人独立撰写，文责自负。研究生签名欹净导师签名：≯吼鬈气≥孓0℃中文摘要米诺环素对戊四氮致痫大鼠海马的保护作用摘要癫痫(epilepsy,EP)是一组由大脑神经元异常放电所引起的以短暂性中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾病。癫痫发作可导致神经元损伤，其中有一部分是通过细胞凋亡实现的。其中NMDA受体介导的兴奋性毒性是神经元损伤的重要机制之一。谷氨酸是脑内最主要的内源性兴奋性氨基酸。在癫痫、脑外伤号慢性退行性神经疾病等病理过程中，谷氨酸通过激动其突触后膜谷氨酸受体产生兴奋性毒性，参与神经元损害，以NMDA受体介导的兴奋性毒性为主。NMDA受体亦可介导癫痫脑损伤病理中神经胶质细胞活化及产生损伤

3、性物质(如iNOS，ICE等)释放。米诺环素(盐酸二甲胺四环素，minoeyelinehydroehloride)为第二代人工半合成四环类抗生素，其抗菌谱与四环素相似。近年一些研究表明，在脑缺血、脑外伤、阿尔茨海默氏病和帕金森病及边缘叶癫痫发作大鼠模型上，米诺环素均有显著的神经保护作用。由于米诺环素口服后迅速被吸收，脂溶性较高，组织穿透性好，且可以通过血脑屏障作用于中枢神经系统，所以更加引起人们的重视。目前，已报道该类药物神经保护作用的一些机制，米诺环素在各种模型上均表现出了神经保护作用，但其在全身性癫痫模型上对神经元的保护作用，以及药物剂量与神经元的保护作用的关系尚未报道。在全身性癫痫模型中

4、米诺环素能否拮抗NMDA受体，能否抑制NMDA中文摘要受体介导的兴奋性毒性，其抑制NMDA受体的兴奋性毒性是否通过直接环节发挥作用，米诺环素能否减少凋亡的发生是本实验关注的焦点。目的：用戊四氮(Pentylenetetrazol，PTZ)制造癫痫大鼠模型，用不同剂量的米诺环素进行干预，检测海马区中细胞凋亡，海马CAl、CA3区NMDA受体型亚单位(NRl)表达情况，进一步探讨不同剂量米诺环素对致痫大鼠神经元的作用，米诺环素是否能直接拮抗NMDARl。方法1分组采用完全随机设计。将60只成年雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠随机抽取8只作为正常组(normal)，其余52只用戊四氮制造

5、癫痫模型，筛选造模合格大鼠32只随机分为：戊四氮致痫组(PTZ)和致痫后米诺环素每次20mg／kg干预组(MTI)、致痫后米诺环素每次45mg／kg干预组(MT2)、致痫后米诺环素每次90mg／kg干预组(MT3)。2造模正常组腹腔注射生理盐水，致痫大鼠按45mg／kg腹腔注射PTZ溶液，每次注射间隔48d,时，直到点燃(出现RacineV级)。3给药各米诺环素干预组于癫痫终止后30分钟内给予米诺环素灌胃。MTl组首剂给予40mg／kg，以后每12小时给予20mg／kg。MT2组首剂给予90mg／kg，以后每12小时给予45mg／kg。MT3组首剂给予180mg／kg，以后每12d,时给予90

6、mg／kg。PTZ组和正常组给予蒸馏水灌胃d共灌胃5天。中文摘要4脑电图将大鼠麻醉后固定于固定架上，采用头皮针状电极单极导联法，于大鼠顶骨正中左右两侧头皮下处留置针灸针，待大鼠清醒后制作模型，观察痫性放电的频率及其振幅变化。5免疫组织化学染色麻醉状态下经左心室行主动脉插管，4％多聚甲醛溶液进行灌注，取脑固定，常规包埋，标本冠状位石蜡切片。经过抗原修复、小牛血清封闭后，)JIJNMDARl抗体，在经二抗、三抗孵育，DAB显色后置显微镜下观察记录。6原位末端标记DAN片段灌注，固定，常规包埋，切片同上。经脱蜡、蛋白酶消化后，加入TUNEL反应液，滴加复合液，DAB显色，置镜下观察。结果1癫痫行为学

7、造模大鼠均出现不同程度的痫性发作，造模成功。2脑电图。致痫大鼠脑电图出现阵发尖波。正常对照组大鼠脑电无异常。3免疫组织化学结果正常组与其它各组之间比较，正常组NMDARl光密度值最低都具有显著性差异(尸<0．05)。戊四氮模型(PTZ)组与米诺环素各干预组之间比较，光密度值无显著性差异(尸>0．05)。米诺环素各干预组之间光密度值无显著性差异(尸>0．05)。光镜下观察，免疫组织化学染色后，正常组