喉鳞癌中Mi R-195对靶基因DCUN1D1表达的调控及其机制研究

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1、分类号：R739.86学校代码：10062密级：学号：2014701167博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：喉鳞癌中MiR-195对靶基因DCUN1D1表达的调控及其机制研究TITLETheExpressionandStudyofMiR-195andTargetGeneDCUN1D1inLaryngealSquamousCellCarcinoma一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：双羽指导教师：张仑教授天津医科大学研究生院二〇一七年五月分类号：R739.86学校代码：10062密级：学号：20

2、14701167学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：喉鳞癌中MiR-195对靶基因DCUN1D1表达的调控及其机制研究TITLETheExpressionandStudyofMiR-195andTargetGeneDCUN1D1inLaryngealSquamousCellCarcinoma一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：双羽指导教师：张仑教授导师组成员：周旋副教授天津医科大学研究生院二〇一七年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个

3、人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：2017年05月20日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据

4、库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：2017年05月20日导师签名：日期：2017年05月20日天津医科大学博士学位论文中文摘要目的：从喉鳞癌的microRNA差异性表达谱中筛选特异性的miRNA进行相关研究；通过生物信息学方法预测miR-195的靶基因并验证其靶向调控关系；研究miR-195与靶基因DCUN1D1在喉鳞癌及癌旁正常黏膜组织中的表达及其相关性；分析两者与喉鳞癌临床病理参数的关系并对喉鳞癌患者的预后进行判定；体外实验研究miR-195对喉鳞癌细胞

5、增殖、克隆、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期的影响；体内实验研究miR-195对人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠成瘤的影响；通过检测肿瘤转移侵袭过程中关键分子的表达，探讨miR-195和DCUN1D1参与喉鳞癌迁移侵袭过程中的分子机制。方法：通过生物信息学预测miR-195的靶基因为DCUN1D1，通过双荧光素酶报告基因检测方法印证两者的关系；通过qRT-PCR法以及免疫组织化学方法分别检测miR-195和靶基因DCUN1D1在喉鳞癌及癌旁正常黏膜组织中的表达情况；将miR-195和DCUN1D1的表达结合喉鳞癌患者的临床病理参数、术后随访

6、资料进行分析，评价两者在喉鳞癌中的临床意义及其与喉鳞癌患者预后的关系；利用基因转染技术在喉鳞癌细胞中转染miR-195模拟物，采用MTS法、平板细胞克隆形成实验、划痕实验、Transwell法、流式细胞术等实验方法，检测miR-195对喉鳞癌细胞功能的影响；通过人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠荷瘤模型观察miR-195抑制肿瘤效果；采用RNA干扰技术将DCUN1D1siRNA转染至喉鳞癌细胞，通过MTS法观察DCUN1D1siRNA对喉鳞癌细胞增殖的影响；通过功能拯救的实验方法利用Transwell法观察miR-195、miR-195

7、+DCUN1D1及DCUN1D1siRNA对喉鳞癌细胞迁移侵袭的影响，采用Western-blot方法检测miR-195、miR-195+DCUN1D1及DCUN1D1siRNA对肿瘤侵袭转移过程中关键蛋白的变化。结果：野生型（DCUN1D1Wt3’-UTR组）荧光活性变化倍数与对照组的荧光活性变化倍数相比，差异有统计学意义（P<0.01）。而突变型（DCUN1D1Mut3’-UTR）组的荧光活性倍数与对照组的荧光活性变化倍数比较，差异无统计学意义（P>0.05）。卡方检验结果显示在低表达的miR-195在T3+T4期、N+期、

8、临床中晚期（III+IV）喉鳞癌患者中的比例明显升高，差异均有统计学意义（均P<0.05），而低表达的miR-195在T1+T2期、N0期、临床早期（I+II）喉鳞癌患者中的比例明显降低，差异均有统计学意义（均P<0.05）。miR-195的表达分I天津医科大学