mlh1基因在喉鳞癌中的表达及意义论文

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1、MLH1基因在喉鳞癌中的表达及意义论文【摘要】目的：探讨人喉鳞癌中MLH1基因的表达及意义。方法：采用免疫组化法分别检测20例喉癌组织及癌旁组织MLH1基因的表达。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对MLH1基因的表达进行定量分析。结果：喉癌癌细胞核和细胞质中可见少量的棕黄色颗粒,MLH1基因表达弱;对照组中,细胞核及细胞质中可见一些棕黄色颗粒,MLH1基因表达强。图像分析结果显示:喉癌组MLH1基因表达的平均光密度为0.0694±0.0018,对照组MLH1基因表达的平均光密度为0.2518±

2、0.0257;喉癌组MLH1基因表达的阳性面积率为0.0738±0.0021,对照组MLH1基因表达的阳性面积率为0.3257±0.0350，经单因素分析喉癌组与对照组比较，差异有显著性(P0.05)。结论：MLH1基因在喉癌组织中表达降低,可能在喉癌的发生机制中起了一定的作用。【关键词】喉鳞癌;人类错配修复基因;免疫组织化学MLH1是人类错配修复基因(humanmismatchrepairgene,hMMR)家族中一个重要的基因，MMR对保持遗传信息的完整性和稳定性，避免遗传突变的产生具有重要作用，MLH1的功能缺

3、陷被认为是肿瘤发病的重要机制,成为近年来研究的热点。研究表明，MMR与结直肠癌、食管癌、胃癌、宫颈癌等关系密切1，2.freelpus公司)。1.3方法1.3.1蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。1.3.2免疫组织化学SP法检测MLH1相关抗原具体步骤：①4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min

4、以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;⑤甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑦滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反

5、应;⑨苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为阳性对照组。1.3.3免疫组织化学结果判断MLH1基因以胞核或胞质出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对MLH1基因的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400),测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性

6、反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。1.4统计学处理数据以均数±标准差表示，用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验，检验水准α为0.05。2结果喉癌癌细胞核和细胞质中可见少量的棕黄色颗粒,.freelicrosatelliteinstability,MSI),使癌基因、抑癌基因的突变积累,导致癌基因激活

7、和抑癌基因失活,最终引起细胞恶变,肿瘤形成。其中hMLH1和hMSH2研究较为透彻,其功能缺陷或表达降低,与胃肠道、呼吸和泌尿系统等肿瘤的发病关系密切。MSI的发生与MMR的表达存在相关性，微卫星不稳定和错配修复基因异常可能参与部分喉鳞状细胞癌的发生6。但是也有相反结论，Smigiell7认为喉癌MLH1基因失活并不会导致MSI。错配修复(MMR)是DNA修复的主要途径之一,它针对DNA发生错配的碱基进行修复,是通过细胞内的错配修复系统来完成的。该系统由错配修复基因编码的一系列酶组成,存在于原核生物和真核生物中,能够

8、特异性识别、切除并修复错配碱基,以保证DNA复制的忠实性,保持遗传物质的稳定性和完整性,从而避免基因突变的发生8。在错配修复过程中,hMSH2其蛋白表达产物分别与hMSH6和hMSH3蛋白构成异源二聚体hMutSα和hMutSβ,识别碱基错本配并与之结合,启动修复过程,而且hMSH2基因的作用处于主导地位9，10。hMLH1蛋白在执行错配修复时