MicroRNA-30d-5p通过靶向调节LDHA表达对胆囊癌增殖、侵袭和凋亡影响的初步研究

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1、学校代码10459学号或申请号密级专业博士学位论文MicroRNA-30d-5p通过靶向调节LDHA表达对胆囊癌增殖、侵袭和凋亡影响的初步研究作者姓名：闫婧雅导师姓名：阚全程学科门类：医学专业名称：内科学（消化）培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2018年11月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityForthedegreeofDoctorEffectsofMicroRNA-30d-5pontheProliferation,InvasionandApoptosisofGallblad

2、derCancerbyRegulatingtheExpressionofLDHAByJingyaYanSupervisor:Prof.QuanchengKanDigestiveSystemDepartmentTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityNovember2018原创性声明：所呈交的学位论文，本人郑重声明，是本人在导师的指导下独立进行研宄所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研宄作

3、出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年＜月日／学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。、根据郑州大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学一位论文或与该学位论文

4、直接相关的学术论文或成果时，第署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：曰期：２００年夕月／曰摘要MicroRNA-30d-5p通过靶向调节LDHA表达对胆囊癌增殖、侵袭和凋亡影响的初步研究摘要研究背景胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤，恶性程度高，预后差。早期手术切除是目前唯一改善患者预后的有效手段。然而，由于胆囊癌早期无典型临床症状，无特异性血清学指标，各项影像学检查均存在一定的局限性，导致胆囊癌早期诊断困难。因此迫切期待寻找到胆囊癌的关键基因并应用于靶向治疗，提高患者生存率和长期预后

5、。Warburg效应是肿瘤代谢的特征性表现，在许多肿瘤中表现为高效的有氧糖酵解和低效的ATP产生。在有氧糖酵解期间，LDHA将丙酮酸代谢为乳酸，为肿瘤细胞快速生长和大量物质合成提供需要的能量。在乳腺癌，结直肠癌、胰腺癌等多种肿瘤中观察到LDHA表达增加，并且与预后不良相关。LDHA敲除后乳酸水平降低，细胞活力和侵袭能力降低。体外和体内研究均表明，LDHA通过调节细胞糖酵解代谢展现其致癌活性。然而LDHA在胆囊癌中的表达水平和其参与能量代谢的过程尚少见报道。miRNA通过控制多种靶基因来调节如细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡等多种

6、生物学行为。我们课题组的前期研究表明miRNA的异常表达与多种肿瘤的发生和进展有关。亦有研究报道表明miRNA可能通过不同的信号通路抑制或促进胆囊癌患者相关基因的表达，并可能作为致癌基因或者抑癌基因为胆囊癌的诊断和治疗提供新的策略。综上所述本研究第一部分验证LDHA在胆囊癌组织中的表达和定位情况，分析LDHA表达与患者临床特征间的相关性。第二部分首先在细胞水平，通过下调LDHA的表达或活性，观察胆囊癌细胞增殖、侵袭、成瘤能力及细胞凋亡情况，然后通过检测葡萄糖消耗、乳酸以及ATP水平，研究LDHA对Warburg效应的影响。

7、最后通过祼鼠成瘤实验观察LDHA敲除对胆囊癌细胞成瘤能力。I摘要第三部分利用生物信息学手段综合筛选并鉴定LDHA的靶基因miR-30d-5p，在胆囊癌组织和细胞水平过验证miR-30d-5p靶向调节LDHA及其对胆囊癌生物学行为的影响。第一部LDHA在胆囊癌组织中表达及其与临床特征的相关性分析目的：研究LDHA在胆囊癌组织中表达及定位情况，分析LDHA表达与患者临床特征的关系，为进一步的胆囊癌基础研究提供临床依据。方法：通过郑州大学第一附属医院伦理委员会批准，共收集胆囊癌石蜡组织样本171例（胆囊癌样本128例，癌旁样本4

8、3例），冰冻组织7例（包含胆囊癌组织和配对的癌旁组织），石蜡标本经HE染色和免疫组化染色验证LDHA的表达情况；冰冻标本通过免疫荧光技术观察LDHA在胆囊癌细胞中的定位；通过Westernblot验证LDHA在蛋白水平的表达差异。将LDHA表达情况与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、病理分级、TNM分