mir-199靶向调控rock1影响肾癌细胞增殖、侵袭及凋亡的机制研究

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1、分类号密级ＵＤＣ编号，讀似滲语去学位论文ｍ－１９９ＲＯＣＫ１ｉＲ祀向调控影响肾癌细胞増值、侵袭及调ｔ的机制研究ＳＵ－ｉｄｙｏｎｍｉＲ１９９ａｆｆｅｃｔｓｋｉｄｎｅｃｅｌｌｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｙｐａｏ化ｓｉｓｂｈｒｅｔｉｎＲＯＣＫ１ｐｐｙｇｇ陈鹏亮导师姓名郑少斌专业名泌尿外科培养类型论文提父日期２０１５年３月２０日南方医科大学２０１０级博壬学位论文－ｍｉＲ１９９觀向调控民ＯＣＫ１影响督癌细胞增殖、侵袭及调亡的机制研究－１ｔｓｃｅｎｖ

2、ａｓｏ打ａｎｄＳｔｕｄｏｎｍｉ民９９ａｆｅｃｋｉｄｎｅｌｌｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｉｙｙｐ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｔａｒｅｔｉｎＲＯＣＫｌｙｇｇ课题来源：无学位申请人陈鹏亮导师姓為郑少斌专业若称泌尿外科培养类型学术型培养层次博壬研究生所在学院第一临床医学院答辩委员会主席丘少鹏教授答辩委员会委员胡卫列教授周祥福教授，钟惟德教授毛向明教授２０１５年３月２０日广州博击学位论文ｍ－１９９ｉ民靴向调控Ｒ０ＣＫ１影响督癌细胞增殖、侵袭及调亡的机制研究保ｉ：研究生：陈鹏

3、亮指导教师：郑少斌教授摘要研究背景肾癌是泌尿系最常常见恶性肿瘤之一％？，其发病率约为全身恶性脚瘤的２３％，其中８０％＾上为源于肾近曲小管的肾透明细胞癌，并且Ｗ每年２％的速度递增。目前肾癌的主要治疗方式仍为手术切除，尽管近年来随着疾病筛查的普及和监测手段的先进化，早期小肾癌发现率越来越高，症状性肾癌的发生率逐渐？，３０％减少，但临床中仍有不少局部进展期肾癌的病例检出约２０％肾癌患者明确诊断时已发生淋己结转移或静脉内癌栓形成。而转移性肾癌会大大减低患者的生存率和治疗效果？此外，即使患者进行了根治性手术切除，仍然有２０％３０％；患

4、者术后３年内会出现复发及转移；再加上肾癌本身对传统放疗及化疗并不敏，，感，从而使得手术无法切除的晚期肾癌患者治疗较为困难预后较差。因此做到对肾癌患者的早期诊断及早期治疗，具有重要的临床意义。肾癌的早期发现及治疗依赖于对其发生机制的详细阐明。然而由于肾癌起、因、发生及发展过程较为复杂，目前大量研究广泛涉及到多种机制多个基因及分子的共同参与，且对各个方面因素的具体作用和重要程度无从判别，现阶段科学研究仍处于广撒网、多点突破的阶段，因此各个方面都被进行了研究。近年來研究表明ｍｉｃｒｏＲＮＡ与多种恶性肿瘤的发生及发展密切相关，且由于其突出的作用，

5、越来越被大家所重视和深入研究。在肾癌中，也发现多个ｍｉＲＮＡ－ｍ－２００ｃｍ、ｍ－表达的异常，包括ｉ民、ｉＲ１４１ｉＲ２００ｃ等。同时，研究发现在肾癌细Ｉ中文摘要－ｍ－胞系中过表达ｍｉ艮２００ｃ、ｉＲ１４１可下调ＺＥＢ２蛋白表达，从而抑制肿瘤细胞的黏ｍ－ｉＲ３４ａＹＹ１附和侵袭；低表达于肾癌组织的，通过调控抑制肾癌细胞的増殖和－－２７ａＦ０Ｘ０Ｒ侵篡ｍｉＲ可下调１表化进而促进肾癌细胞的增殖；ｍｉ１３４通过祀７８６－０。向调节ＫＲＡＳ，起到抑制肾透明细胞癌细胞的上皮间质转化的作用一ｍ－同时，近年来研究也发现ｉＲ１９９ａ低表达于肾癌姐织，

6、可能作为个抑癌基因，参与肾癌的发生，但其作用机制及其生物学功能研究尚少，很多机制尚。未完全阐明，仍具有较大的潜在研究价值为此，我们开展了本研究。目的ｍ化－１．探讨巧９ａ在肾癌及癌旁相对正常组织中的表达，分析其表达与肾癌患者预后的关系；－．１９９地肾癌中的表达对细胞增殖、侵袭及调亡的影响２探讨ｍｉ民；－３ｍａ－．探讨ｉ民１９９与其下游靴基因及上游调控基因的作用关系，阐明ｍｉＲ１９９在肾癌中的作用机制；魏－－ａ１．采用ｑＲＴＰＣＲ定量检测ｍｉＲ１９９在３９例肾癌患者肿瘤组织及其癌旁相对正常肾组织中的表达量－，并分析ｍｉＲ１９９ａ在

7、肾癌中的表达与患者预后的关系。２－．采用慢ｍｉＲａ４９８细胞病毒感染的方法，构建稳定过表达ｌＷ的Ａ株和空载对ＲＴ－照组细胞株，并采用ｑＰＣＲ进行验证。３．采用ＭＴＴ实验、平板克隆实验检测肾癌细胞的増殖情况；应用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ试验检测细胞的侵袭能力；利用流式细胞仪检测肾癌细胞的调亡情况。ｍ－４．通过鞭基因预测网站，结合生物信息学分析筛选ｉＲ１９９ａ下游的候选鞭基因－，明确民ＯＣＫ１可作为ｍｉＲ１９化的直接祀基因。通过构建ＲＯＣＫ１突变化民ＯＣＫ１Ｒ－４９８将与ｍｉ１９化共转染肾癌Ａ细胞株，采用巧光素酶报告实验