南瓜韧皮部特异启动子dENP在转基因马铃薯中的表达特征

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1、黑龙江八一农垦大学硕士学位论文南瓜韧皮部特异启动子dENP在转基因马铃薯中的表达特征姓名：张科申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：殷奎德;田颖川20050401摘要马铃薯是世界上仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物，也是我国的第四大粮食作物。马铃薯既是重要的粮食作物，又是大宗蔬菜作物，还广泛用于食品深加工和淀粉、酒精等1：业加工用途。因此，马铃薯在我国工农业生产中占有重要地位。然而，马铃薯病虫害严重影响其产量和品质，其中最主要的病害是由蚜虫引起的病毒病，其不仅直接吸食马铃薯叶片汁液，也

2、传播病毒引起马铃薯病毒病的流行。当前，利用基因工程技术把一些外源的抗虫、抗病、抗逆等基因的表达框架导入到植物中，获得了很大的成功。但转基因植物中外源基因的表达框架的启动子主要是组成型表达启动子+如caMv35s，ubiquhin等，这些启动子使得外源基因在植物体各个部位表达，不能集中在某些昆虫危害的组织器官，使一些昆虫不取食的组织器官也得到表达，造成了外源蛋白利用的不经济，加重了植物的负担，也给转基因安全带来较人的压力。本试验利用已经克隆构建的增强型南瓜韧皮部特异启动子dENP驱动GuS基因，在

3、口Brl2l的基础上构建了植物表达载体pBdENP，同时利用含有Ca~Ⅳ35s启动子和Gus嵌合基因的pBll2l植物表达载体作为对照，二者同时通过农杆菌介导的方法转化马铃薯。通过抗性筛选、再生芽伸长、生根等组织培养，获得100多棵抗性转基因再生植株。通过pcR初步鉴定，大约有60％为阳性；对这些PCR阳性植株进行southemblot验证，确定外源基因的插入位点和拷贝数。最后对7个独立转化体进行GuS的组织化学染色定性检测和GUs酶活性的定量测定；结果表明舯启动子驱动的Gus在马铃薯的韧皮部中

4、特异表达，其表达的效果和ca~Ⅳ35s驱动Gus表达效果相当。因此dENP启动子可以作为驱动抗蚜和抗病基因转化马铃薯，获得韧皮部特异表达的转基因抗蚜和抗病马铃薯，为马铃薯抗病虫育种提供种质资源。关键词：马铃薯，韧皮部，启动子，转基因AbstractThepotatoisthefourchlargestcerealcropssecOndOnlyt0therice，whe咄maizeintheworld，itismefounhlaJgcstcerealcropsofollrcoumryt00．The

5、potat0istheimporcaIltcerealcrops，andala玛eVegetablescrop，stil】usedinsuchindus仃yasf的ddeepprocessingandst眦h，alcohol，etc．醐dthepotatooccupiestheimportants啪sinourcoWlny’sindust^alandagricul咖lproduction．Howeve‘tllep1种tdiseasesandinsectpestsoftllepo诅toarcse—

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