从卵巢癌cDNA文库筛选新的肿瘤标志物

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1、苎至圭塑墨三曼登盔兰堡主!!!!一中文摘要肿瘤免疫学的核心问题之一是肿瘤特异性抗原的寻找。利用SEREX技术，以肿瘤患者自体血清筛选肿瘤细胞eDNA表达文库获得肿瘤特异性抗原。是肿瘤免疫学研究中的新策略，应用该方法寻找和获得的肿瘤排斥抗原或相关抗原，一方面可为选择特异性肿瘤抗原用于肿瘤的临床诊断和免疫治疗提供理论依据；另一方面有利于从理论上探讨机体对肿瘤抗原的体液免疫应答机制，以及抗体识别的抗原表位和CTL识别的抗原表位之间的关系。本论文采用SEREX的方法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库，对所得到的阳性克隆进行分析鉴定。通过3轮免疫学筛选，我们得到了27

2、个阳性克隆，对其进行序列分析和同源性比对，初步了解了阳性克隆的性质，为进一步开展功能分析奠定基础。(同时选取MY-OVA-2、MY·OVA-7和MY-OVA．13三个阳性基因，利用基因工程的方法克隆其全长基因，并经过测序鉴定，选取pET．32a作为表达载体，构建得到相应的表达质粒，在大肠杆菌中成功表达6XHis融合蛋白：采用亲和层析和蛋白酶处理的方法得到纯度90％以上的蛋白：SDS．PAGE电泳和Western．Blot分析结果证实该蛋白在大肠杆菌中表达的高效性。分别采用Dot．blot和ELISA的方法检测了三个目的蛋白抗原在正常人和肿瘤患者中的血清学反应格局。采用

3、点杂交对13例正常人和74例肿瘤患者血清的测定结果显示，MY．OVA．13的抗体只在肿瘤组中检测到，在正常组中为阴性：MY．OVA一2和MY-OVA．7在两组人群的血清中自身抗体检出率均呈现阳性，不同的肿瘤类型的阳性率各不相同：采用间接ELISA方法测定了36例正常人和86例肿瘤患者血清中针对上述三种蛋白抗原的抗体含量。结果显示，肝癌、肠癌、卵巢癌、胃癌和前列腺癌中MY．OVA．13抗体的0D数值均高于正常对照组，其中肝癌和前列腺癌的数值和正常组相比，在统计学上有显著差异(P

4、癌患者中显著下降(P

5、深入h，／研究。了／关键词：SEREX；卵巢癌；肿瘤排斥基因；肿瘤标毒物：血清学筛选苎差圭!苎苎三曼型查兰雯主堡苎ScreeningnewtumormarkersfromeDNAexpressionlibraryofovarianca_fleerAbstraetThemoleculardefinitionoftumor·rejectedantigensisacentralgoalofstudyintumorimmunology．Withregardtotumorantigensrecognizedbyautologoushumanantibodies．amethodr

6、eferredto酗SEREX(serologicalanalysisnfrecombinanteDNAexpressionlibraries)hasbeendeveloped，whichcontributessignificantlytoourunderstandingofthehumoralimmuneresponsetocancer．AccordingtoSEREXapproach，acDNAlibraryisconstructedfromfleshtumorspecimens，followedbyascreeningwithhigIl·titerautolog

7、ousantibodiesexitingintheseraoftumorpatients．PositiveclonesaresubjectedtobesequenceddirectlyandthenucleotidesequenceoftheinsertedeDNAisdetermined．Throughthistechnique，newtultlor—rejectedantigensortumor-associatedantigenscallbeidentifiedforclinicaldiagnosisandimmunotherapyofcanc