社区两种耐药菌的耐药机制及分子流行病学研究

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1、·英文缩略语·缩略词lO中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：囤盍造日期：鲨垒塑中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产

2、权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：盟盍姿兰指导教师签名：：睦l：生蓼日·中文论著摘要·摘要社区两种耐药菌的耐药机制及分子流行病学研究目的产超广谱p一内酰胺酶(extended—spec

3、trum13-1actamasesESBLs)的革兰氏阴性杆菌感染多在医院内流行甚至爆发流行，但近来研究显示在社区获得性感染中分离率日益增高，目前关于社区居民中产ESBLs大肠埃希菌流行状况知之甚少，本研究旨在调查社区老年人肠道携带产ESBLs大肠埃希菌的流行情况、相关危险因素以及ESBLs的基因型，以确定产ESBLs大肠埃希菌在社区流行的程度及其特点。本研究还调查分析了本地区青霉素不敏感的肺炎链球菌(penicillinnonsusceptiblestreptococcuspneumoniaePNSP)临床分离株的青霉素结

4、合蛋白(PBP)2b、2x及1a的基因变异特点，深入探讨其耐药机制；并采用多位点序列分型(MLST)对PNSP菌株进行基因分型以及确定与国际流行株的关系。上述研究将为控制和预防本地区青霉素不敏感肺炎链球菌的出现、传播及进化提供有益的线索。方法在铁西及东陵五个社区，共调查了286名社区老年人，填写调查问卷f包括姓名、性别、年龄：慢性疾病史如糖尿病等；过去3个月内是否应用抗生素；过去3个月内是否住院或外科手术)，获得知情同意后，采集肛拭子标本，立即接种于伊红美兰选择性培养基，培养分离鉴定大肠埃希菌，采用Kirby．Bauer药敏

5、纸片法检测大肠埃希菌对18种抗生素的敏感性。采用纸片筛选法及双纸片协同法筛查产ESBLs的大肠埃希菌。采用脉冲电场凝胶电泳(PFGE)对产ESBLs大肠埃希菌进行同源性分析。应用SPSSl3．0统计软件分析肠道携带产ESBLs大肠埃希菌的潜在危险因素。对产ESBLs大肠埃希菌采用PCR方法扩增ESBLs基因型及测序。另外收集2006年1月至2007年2月中国医科大学附属第一医院肺炎链球菌临床分离株19株，儿童医院肺炎链球菌临床分离株3株，省人民医院肺炎链球菌临床分离株2株，共24株，其中21株来自痰标本，1株分离自血标本，l

6、株分离自脓汁，1株分离自眼分泌物。上述菌株通过奥普托欣纸片及胆汁溶菌实验进行鉴定。采用E．tea法检测肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟的敏感性。选择18株肺炎链球茵(青霉素耐药株9株，青霉素中介耐药株5株及青霉素敏感株4株)进一步采用PCR方法扩增pbp2x、pbp2b、pbpla基因及测序分析。另对9株肺炎链球菌进行MLST分析。结果1．产ESBLs的大肠埃希菌携带率为7．O％。270株大肠埃希菌对亚胺培南及美洛培南均100％敏感，非产ESBLs的菌株对头孢类抗生素敏感率在96％以上，对氟喹诺酮类药物敏感率在74％左右。按照临

7、床实验室标准化研究所(CLSI)的规定，一旦确定为产ESBLs大肠埃希菌应视为对所有头孢类抗生素及氨曲南耐药。19株产ESBLs大肠埃希菌对阿米卡星敏感率94．7％，对阿莫西林／克拉维酸敏感率为63．2％。而且产ESBLs菌常表现出同时对氟喹诺酮类药物，复方新诺明，庆大霉素及四环素耐药。产ESBLs大肠埃希菌的单因素分析显示：3个月内抗生素暴露史与肠道携带产ESBLs大肠埃希菌密切相关(OR值3．2，95％可信区间1．1．9．0P=0．03)。19株产ESBLs大肠埃希菌进行同源性分析，其PFGE图谱呈多样性，提示具有不同起

8、源。2．19株产ESBLs大肠埃希菌均为CTX．M型ESBLs，11株产CTX．M．14型(57．89％)；3株产CTX．M．22型；1株产CTX．M．24型；3株产CTX．M．79型；l株同时产CTX．M．24型及CTX．M．79型(编码CTX．M．79型基因的核苷酸序列G865_A碱基