临床分离泛耐药菌的筛查及铜绿假单胞菌泛耐药机制研究

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1、中图分类号R446．5UDC610硕士学位论文学校代码!Q5三3密级公珏临床分离泛耐药菌的筛查及铜绿假单胞菌泛耐药机制研究Screeningoffinicalisolatedpan’resistntScreeningoIclinicalisolatedpan-drugresistant‘1‘‘■o■nl-·‘strainSandinvestigationoloan-drugresistantmechanismsofPseudomonasaeruginosa作者姓名：李军学科专业：临床医学研究方向：临床检验诊断学学院(系、所)：湘雅医院

2、指导教师：邹明祥副教授论文答辩日期巡．门答辩委贻拂盟中南大学湘雅医院二O一三年五月原创性声明lIIIIIIIIIIIIIIIIIY2424510本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：乏查聋日期：j止年』月卑日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定

3、，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：尘堕年』月望日本课题受以下基金资助1．湖南省发改委研究基金：湖南地区临床主要泛耐药革兰阴性杆菌的流行病学及耐药机制研究。湘发改投资[20121305号。2．中南大学本科生自由探索研究创新基金：长沙地区产金属p．内酰胺酶铜绿假单胞菌的基因特征(ZYl

4、1098)临床分离泛耐药菌的筛查及铜绿假单胞菌泛耐药机制研究摘要目的：(1)Y解本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的临床分布、耐药特征及泛耐药现状。(2)探讨湖南地区临床分离泛耐药铜绿假单胞菌(PDR-PA)的主要耐药机制及分子流行病学特征。方法：(1)连续收集湘雅医院2011年9月1日．2012年6月30日临床分离非重复对碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌以及湖南地区15家医院2011年1月1日．2011年12月31日多重耐药铜绿假单胞菌。VITEK．2全自动微生物分析系统或API对病原菌进行鉴定；K．B法检测抗菌药物的敏感性、筛查泛耐药菌株

5、；药敏结果以软件WHONET5．6进行分析。(2)对37株PDR-PA采用改良Hodge试验初筛碳青霉烯酶、双纸片协同试验和双纸片增效试验筛查金属p．内酰胺酶。(3)PCR坳I．[33种灭活酶基因(包括p．内酰胺酶基因、16SrRNA甲基化酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因等)、13种可移动性元件基因、3种外排泵基因以及外膜蛋白基因，并对扩增产物进行测序及BLAST分析。(4)琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂的抑制试验，观察抗生素的MIC变化。实时荧光定量PCR检测外排泵基因MexA以及外膜蛋白基因OprD2的相对表达量。(5)脉冲场凝胶电泳

6、技术(PFGE)和聚类分析法进行菌株间同源性分析。结果：(1)205株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌主要来源于呼吸道标本，占79．O％；科室分布以ICU(55．6％)为主。头孢哌酮／舒巴坦敏感率最高，为52．2％，对其他抗菌药物的耐药率达52．7％一100％，且监测到8株泛耐药鲍曼不动杆菌。(2)15家医院共分离到37株PDR-PA，改良Hodge实验阳性8株，阳性率为21．6％。金属p．内酰III亟±堂僮论窒主塞擅墓胺酶初筛阳性5株，阳性率为13．5％。(3)37株PDR-PA中，其灭活酶基因阳性有TEM、armA、rmtB、VIM,

7、IMP和CARB，阳性率分别是100．O％、22．O％、5．O％、19．O％、22．O％和37．8％。可移动性元件tnpU、tnp513、tnpA／tn21、merA和IntI等5种基因为阳性，阳性率分别为16．O％、81．O％、49．O％、100．O％和100．O％。所有阳性基因经BLAST分析证实，与Genbank中已知序列同源性均大于98．O％。(4)37株PDR-PA中，外排泵抑制试验阳性34株，阳性率为91．9％。对照组和实验组MexA基因的相对表达量分别为O．704-O．13以及1．95±O．48(P=0．018)，而Op

8、rD2基因的相对表达量分别为3．18±O．60以及O．94±O．08(e=-o．002)。(5)37株PDR-PA可分为21个型，A型最多，共5株。A1亚型同时出现在湘雅医院和湘雅三医院，E1亚型分别出现在湖南省第二人民