3、周时肾组织中CGRP与ET的表达进行观察，探讨CGRP和ET的拮抗作用与DN发生、发展的关系。并用阿魏酸钠、氯沙坦和贝那普利三种药物进行干预治疗，对比、分析三种药物对糖尿病大鼠肾脏的中文摘要保护机制。方法:1材料:选择清洁级健康雄性Wister大鼠70只，体重120-150g，随机分为正常对照组(A组)，糖尿病组(B组)，阿魏酸钠治疗组(C组)，氯沙坦治疗组(D组)，贝那普利治疗组(E组)各14只。糖尿病模型建立采用腹腔一次性注射链脉佐菌素(STZ购自Sigma公司，溶于0.1mmol/1构糠酸缓冲液，pH=4.5)65mg/
4、kg,A组以等量构椽酸缓冲液腹腔注射，注射链脉佐菌素72h后取尾静脉血，测血糖>16.65mmol/L，为模型建立。建模第二天起，C组给与阿魏酸钠(成都第一制药有限公司生产)50mglkg.d，肌肉注射;D组给与氯沙坦(默沙东公司生产)30mg/kg.d,灌胃;E组给与贝那普利(诺华公司生产)l0mg/kg.d，灌胃;A组、B组每日注射等量的注射用水，并予等量的注射用水灌胃。实验期间自由进食、进水，不使用胰岛素及其他降糖药。分别于第4.8周各处死7只大鼠，处死前1天用代谢笼留取24h尿液，处死当天以3%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠
5、，行右侧颈总动脉插管，接XY1型血压监测仪记录平均动脉压，并收集血标本。左肾经生理盐水充分灌洗后称重，以10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，右肾液氮保存备用。2生化测定:测24小时尿蛋白定量(721分光光度计比色法)，血糖、血肌醉、血尿素氮(美国Bekemen公司，全自动生化分析仪LX20法)。3免疫组化染色:免疫组化采用SABC法，按试剂盒说明进行操作。用1:200稀释的兔抗人CGRP和ET抗体，检测各组大鼠肾组织中CGRP和ET的表达与分布情况。’--一一-一一-z一一一州，一卜一，尸，一，一-中文摘要以镜下出现棕黄色颗粒为
6、阳性染色。4RTPCR:采用TRIzol试剂(异硫氰酸呱一酸性酚一步法)提纯各组肾组织总RNA，加入反转录体系于42℃进行3h;将CGRP和ET的引物加入PCR反应体系，进行30--40次PCR循环。结果:1生化结果:4周和8周时，大鼠体重A组高于B组、C组、D组和E组(P<0.01)，C,D,E组高于B组(P<0.05)1血压、血糖、24小时尿蛋白定量A组低于C,D,E组和B组(P<0.01),C,D,E组低于B组(P<0.05),C,D,E组间无差异。各组4周与8周间有差异，但无统计学意义(P>0.05)，血肌配、血尿素氮
7、4周时各组无明显差异，8周时A组低于C,D,E组和B组(P<0.01),C,D,E组低于B组(P<0.05),C,D,E组间无差异。。2免疫组化:4周和8周时，’肾组织中CGRP的表达A组高于B组、C组、D组和E组(P<0.01)，C,D,E组高于B组(P<0.05),ET的表达A组低于C,D,E组和B组(P<0.01),C,D,E组低于B组(P<0.05),C,D,E组间无差异。各组4周与8周间有差异，但无统计学意义(P>0.05).CGRP和ET均分布于肾小球内皮细胞、系膜细胞和肾小管上皮细胞。3RTPCR:4周和8周时，
8、肾组织中CGRP的mRNA表达A组高于B组、C组、D组和E组(P<0.01)，C,D,E组高于B组(P<0.05),ET的表达A组低于C,D,E组和B组(P<0.01)，C,D,E组低于B组(P<0.05)eC,D,E组间无差异。各组4周与8周间有统计学意义(P<0.05).
