苯扎贝特促进小鼠巨噬细胞胆固醇逆转运体内和体外研究

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1、博士学位论文中文摘要摘要背景大量临床流行病学研究发现，人群中血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL．C)水平与冠心病发生率呈负相关，提示HDL具有抗动脉粥样硬化作用。胆固醇逆转运(RCT)是机体排出过多胆固醇的唯一途径，也是HDL抗动脉粥样硬化的重要机制之一。RCT指的是将外周组织细胞(包括巨噬细胞)游离胆固醇通过脂蛋白转运至肝脏，再通过肝脏排泄的过程。巨噬细胞是动脉粥样硬化病变的主要细胞成分，巨噬细胞过度荷脂转变为泡沫细胞，沉积于动脉壁形成早期的粥样斑块。因此，巨噬细胞RCT对动脉粥样硬化的发展起着最为关键的作用。三磷酸腺苷结合盒转运体超家族(ABCAl、AB

2、CGl、ABCG5、ABCG8等)、B族清道夫受体ffsg．B0、胆固醇70【羟化酶(CVP7A1)等多种蛋白、受体、转运体参与RCT，并受肝X受体(LXata)的调节。苯扎贝特是目前临床上常用的调血脂药物，可以明显降低甘油三酯(TG)和升高HDL．C。大规模临床研究证实苯扎贝特能有效延缓动脉斑块的形成，降低冠一tl,病患者的临床终点事件发生的危险性。苯扎贝特抗动脉粥样硬化的机制除了其调节血脂如降低TG和升高HDL．C外，可能还具有调脂外的作用如抗炎、抗凝作用。对于RCT的作用的研究，苯扎贝特仅限于对RCT中转运蛋白如ABCAl、ABCG5的影响。然而，

3、长期以来缺少对在体RCT的评价方法。本研究在Rader实验室的方法基础上建立了替代方法，观察苯扎贝特对巨噬细胞胆固醇逆转运体内、体外的影响，并探讨其可能的机制。博士学位论文中文摘要目的观察苯扎贝特干预后小鼠血脂浓度变化，以及血清、肝脏及粪便中3H．胆固醇占经腹腔注射3H．胆固醇总量的百分比。研究苯扎贝特对小鼠体内巨噬细胞RCT的影响，苯扎贝特干预后小鼠血清及苯扎贝特对巨噬细胞内胆固醇流出的影响，探讨苯扎贝特调节巨噬细胞RCT的机制。方法以苯扎贝特(O．1％、0．25％、O．5％w／w)干预4周的C57BL／6J小鼠为模型，分别腹腔注射经乙酰化低密度脂蛋白

4、(Ac．LDL)荷脂与3H．胆固醇标记的巨噬细胞悬液，用液闪计数仪测定血清、肝脏、粪便中3H．胆固醇的含量；收集0．25％苯扎贝特组小鼠血清孵育不同剂量的苯扎贝特(O、50、100、2009M)干预的RAW264．7巨噬细胞，测定细胞胆固醇流出；以RT-PCR方法检测肝组织CYP7A1、SR—BImRNA，肝脏和小肠ABCG5、LXRamRNA，巨噬细胞SR．BI、ABCAl、ABCGl、LXR0【删刚A的转录水平表达；再用Western．blot方法检测肝脏和小肠的ABCG5、LXRtz，巨噬细胞ABCGl、LXRct的蛋白水平表达。结果1．小鼠经苯扎

5、贝特(O．1％、0．25％、O．5％)干预4周后，血HDL．C升高，TG降低，这些作用呈剂量相关性趋势。O．5％苯扎贝特组HDL．C水平较对照组明显增高衅0．01)，增幅为26．4％；TG水平较对照组明显降低畔0．01)，降幅为34％。2．采用不同剂量苯扎贝特(O．1％、0．25％、O．5％)干预小鼠，与对照组相比，血3H．胆固醇含量显著增加，增幅分别为100％、131％、110％；肝脏3H．胆固醇含量也显著增加，增幅分别为86．4％、博十学位论文中文摘要52．3％、51．6％；粪便3H．胆固醇含量同样显著增加，增幅分别为110％、140％、160％。3

6、．与对照组比较，苯扎贝特干预后的小鼠血清介导巨噬细胞内胆固醇流出明显增加(尸

7、0．25％，O．5％)干预组小鼠肝脏、小肠ABCG5、LXRamRNA表达与蛋白质表达较对照组明显增高(尸

8、达有关。(2)通过上调肝脏SR．BImRNA的表达，增加肝脏对胆固醇酯的选择性吸