邻苯二甲酸丁基苄酯小鼠神经毒性的体内和体外研究

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1、分类号——UDC密级——编号——誓l}碲黪方零硕士学位论文堡鏊墨里堕!叁茔．堕．丛!氢盘丝耋丝的体内和体外研究学位申请人姓名：闵妥盘申请学位学生类别：全日刿硕士申请学位学科专业：生物化学与分子生物学指导教师姓名：杨旭教授堕塑造进竖⑧M—ASTE⋯R'STHE娜硕士学位论文邻苯二甲酸丁基苄酯小鼠神经毒性的体内和体外研究论文作者：阂安娜指导教师：杨旭教授陈明清讲师学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：分子生物学华中师范大学生命科学学2014年5月⑧硕士学位论文MASTER。STHESISStudyonthemiceneur

2、otoxicityofbutylbenzylphthalate／nATheSisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinBiochemistryandMolecularBiologyByMinAnnaPostgraduateProgramCollegeofLifeSciencesCentralChinaNormalUniversitySupervisor：YangXuAcademicTitle：ProfessorApril，2014

3、黟●●erU．【algS⑧硕士学位论丈MASTER‘STHESIS华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。作者签名：阂善童吖日期：籼，lIc年霸遐日学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学

4、位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密，在年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。作者签名：胁导师签名：彳别日期：≯烨年r月喝日日期：抛，舛炯形El本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交

5、“CALIS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中的规定享受相关权益。回童迨塞堡塞卮造卮；旦圭生；旦二生；旦三生蕉查!作者签名：闰置哪日期：扣I丫年F月磅日导师签名：物触}日期：加／浒厂月移日⑧硕士学位论文MASTER’S1-HESIS摘要目前研究已经发现了有关于邻苯二甲酸丁基苄酯(Butylbenzylphthalate，BBP)的生殖、发育、氧化损伤及内分泌具有一定的毒性干扰作用，然而BBP对动物和人类的神经毒性以及BBP在体内具体的作用机制究竟是怎么样的呢?目前还尚待进一步深入的进行研究与探索。本研究

6、采用体外细胞活力测定、神经细胞毒性实验、凋亡作用和体内整体动物小鼠行为学实验、酶活测定、显微荧光技术相结合的实验方法，来进行BBP神经毒性的综合评价。本研究还平行比较了BBP、DBP以及它们共同的代谢产物MBP对细胞的毒性效应；通过对脑组织切片进行分析、神经递质的变化情况来初步探讨BBP对小鼠学习与记忆能力的影响情况以及可能存在的分子机制。本研究在体外研究中主要是通过MTT法和Hoechst33258染色来进行邻苯二甲酸丁基苄酯的细胞毒性评价；通过对染毒细胞ROS、MDA、GSH含量的检测来探究BBP对小鼠神经瘤细胞的氧

7、化损伤效应。分别采用浓度为的BBP、DBP、MBP来染毒细胞，通过对染毒细胞ROS、MDA、GSH含量的检测来比较这三种物质对小鼠神经瘤细胞的毒性强弱。在进行体内试验时，利用一系列的浓度梯度分别为0(对照组)，50，250及1,250mg／kg的BBP连续两个周对实验小鼠进行灌胃染毒，同时通过一系列的行为学经典实验：Morris水迷宫，悬尾试验以及强迫游泳试验，反映BBP对小鼠学习记忆能力的影响。分别测定了脑、肝、肾组织的氧化损伤水平。为了进一步探究BBP毒性的可能存在的分子机制，测得了左脑组织中5-HT((5．hydr

8、oxytryptamine)和P．CREB含量的变化情况。根据实验结果发现BBP对细胞和组织均有损伤作用。大脑海马切片图显示，随着BBP的暴露，小鼠海马区细胞不完整性逐渐在增加，当BBP的暴露浓度达到了最高浓度组即1,250mg／kg时，海马区细胞开始凋亡，而且约有1／3的背侧海马细胞(控制小鼠空间学习记忆能力)受到