邻苯二甲酸二乙基已酯(dehp)对小鼠神经行为发育的影响及其机制研究

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1、硕士学位论文万方数据邻苯二甲酸二乙基己酯pEI口)对小鼠神经行为发育的影响及其机制研究指导教师姓名、职称壁壹逖单位地址：滥鎏塑垫蠢堂垡茔鱼生全盘堂堂区申请学位级别硕士论文提交时闽2Q兰垒生鱼旦论．文答辩时间2Q!垒生§旦兰墨旦学位授予单位和日期逝鎏堙墓盘堂《2Q兰垒生鱼屋2蓉辩委员会主席壅箜室2014年5月18日万方数据EffectofDi一(2一ethylhexyl)phthalateORNeurobehavioralDevelopmentofmiceandItsMolecularMechanismADissertationinEc

2、ologyUndertheSupervisionofProfessorByZhejiangNormalUniversityJinhua，Zhejiang，ChinaMay，2014万方数据邻苯--Ep酸--E；基己酯(DEHP)对小鼠神经行为发育的影响及其机制研究摘要增塑剂邻苯二甲酸二乙基己酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate，DEI-IP)是一种具有弱雌激素和抗雄性激素的活性的环境内分泌干扰物，它对野生动物和人类的生殖发育毒性已引起广泛关注，但人们对DEHP的神经发育毒性还缺乏认识。研究发现围生期DEHP暴露性别

3、特异性地改变子代大鼠下丘脑视前区芳香酶活性而影响雌激素合成，生命早期暴露于低剂量的DEHP使得雄性大鼠仔鼠血清睾酮显著下降。体外培养的肝细胞DEHP显示出雌激素的效应。以往体外研究也表明，根据浓度不同，DEHP既可以激活ER而表现出雌激素效应，也可以拮抗17p．雌二醇与ER的结合而表现出抗雌激素效应。从而干扰人和动物的内分泌系统。DEHP及其代谢物具有弱雌激素样活性，可干扰体内雌激素和雄激素的正常活动，且由于DEHP的初级代谢产物MEHP能够穿过胎盘屏障及进入母乳，其毒性作用在妊娠期和哺乳期就可以表现出来，可影响性激素敏感组织的发育和

4、长期功能。然而性激素不仅调节机体的生殖发育，研究表明，妊娠期和新生儿期大脑的发育和完善对雌激素样活性物质特别敏感。特别是海马，研究表明海马既是DEHP敏感的脑区也是与行为密切相关的脑区。雌激素可通过雌激素受体p正R9)调节脑发育和再生密切相关的过程(如突触的形成，树突的延伸和分支，神经递质和神经肽的合成)；能够在几分钟内快速诱导多种脑内细胞产生效应，迅速激活多种激酶，如快速激活ERKl／2，进而影响ERK1／2信号转导途径参与的LTP形成及学习、记忆等认知功能。研究表明雌激素的抗焦虑作用是通过ER9介导的。此外有报道睾酮及5a---氢

5、睾酮能够减少啮齿类动物的焦虑样行为。刚出生的雄性幼鼠给予雄激素受体(AR)拮抗剂氟他胺结果发现青春前期在强迫游泳和蔗糖偏好测试中抑郁样行为增加，对抑郁行为的影响伴随着海马神经发生和树突棘的下降。NMDA受体为所有兴奋性突触的突触后必需组份，是脑内最重要的兴奋性氨基酸受体，参与调节神经元迁移、树万方数据突和轴突发育、突触形成与可塑性、学习记忆等活动。此外鉴于谷氨酸能递质系统与焦虑和抑郁行为密切相关，我们设想DEHP暴露影响学习记忆、焦虑和抑郁样行为可能与海马的谷氨酸递质系统、雌、雄激素及其受体有关，ERK1／2信号通路也可能参与了这一过

6、程的调节。研究内容：围生期(妊娠期及哺乳期)母鼠DEHP暴露对青春期及成年期仔鼠的活动性、探究、焦虑、抑郁、空间记忆行为的影响；围生期DEHP暴露对小鼠血清睾酮和雌二醇含量的变化的影响；DEHP暴露对MDNA受体NR2B亚基及ERKI／2磷酸化水平(P．ERKI／2)和雌激素受体∞l邛)和雄雌激素受体㈣表达的影响。研燃：母鼠从妊娠第7天至断乳前(产后2l天)进行DEHP(10、50、200mg／kg／day)灌胃染毒，同时设空白对照组及溶媒对照组。仔鼠出生后第6周和第12周时每个剂量组分别采用旷场、高架十字迷宫、强迫游泳和Morris

7、水迷宫等模型检测DEHP对仔鼠的活动性、探究、焦虑、抑郁、空间记忆行为的影响。分别选未进行行为测试的6周及12周小鼠，按要求取海马，Westernblot检测NMDA受体NR2B亚基，ERKl／2及ERKl／2磷酸化水平，雌激素受体p①邸)、雄激素受体(AR)蛋白的表达。放射免疫法检测雌性小鼠血清中雌二醇的含量以及雄性小鼠血清中睾酮的含量。研究结果：1．围生期10-200mg／kg／dayDEHP暴露不影响母鼠的产仔数及各组仔鼠出生第3天的体长。没有明显改变6周雄性仔鼠的体重及6周龄雄性仔鼠的睾丸系数，显著增加10mg／kg／day和

8、200mg／kg／day雌性仔鼠的体重p