邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究

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1、分类号Q5Q7学校代码10590UDC570_密级公幵i$H大fSHENZHENUNIVERSITY硕士学位论文邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究申请人姓名谭琴申请人学号2120180455专业名称生物学导师姓名及职称徐新云教授二0—五年五月四日原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品或成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。

2、本声明的法律后果由本人承担。论文作者签名：日期：年土月今日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解深圳大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：研宄生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属深圳大学。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其他机构送交论文的电子版和纸质版，允许论文被查阅和借阅。本人授权深圳大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(涉密学位论文在解密后适用本授权书）论文作者签名：@导师签名：日期：年玄月1日日期

3、：7^年&月午日分类号Q5Q7学校代码10590UDC570密级公开深圳大学硕士学位论文邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究学位申请人姓名谭琴专业名称生物学学院（系、所）生命科学学院指导教师姓名徐新云邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究摘要在聚氯乙烯（PVC）等塑料制品的工业生产过程中，通常添加邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（di(2-ethylhexyl)-phthalate，DEHP）用来增加塑料的弹性和韧性。目前DEHP已成为一种全球性的环境污染物，前人诸多研究

4、表明DEHP具有生殖毒性、免疫毒性、神经毒性、三致作用等。为了探讨DEHP的雌性生殖毒性及其分子机制，本研究分别从细胞和动物水平开展实验，首先采用不同剂量DEHP对中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）进行染毒，使用CCK8试剂盒测定DEHP染毒CHO细胞24h和48h的半数抑制浓度IC50，利用荧光定量PCR技术检测DEHP处理24h后细胞凋亡基因（Bcl-2、caspase-8、caspase-9）和癌基因（c-fos、k-ras、p53）mRNA表达水平的改变。然后选择SPF级雌性SD大鼠进行毒性实验，

5、将动物随机分为对照组（玉米油）、DEHP低剂量组（100mg/kg/d）、DEHP中剂量组（500mg/kg/d）、DEHP高剂量组（1500mg/kg/d）4个剂量组，每组10只，每天灌胃1次，每周5次，连续染毒6周。动物实验结束后称量大鼠体重及卵巢湿重，计算卵巢脏器系数；HE染色后普通光学显微镜观察大鼠卵巢病理改变，透射电子显微镜观察卵巢颗粒细胞超微结构的变化；利用荧光定量PCR技术检测DEHP染毒后大鼠卵巢组织凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌

6、基因(c-fos、k-ras、p53)mRNA表达水平的变化。利用Westernblot技术检测DEHP染毒后卵巢中激素受体蛋白黄体生成素受体（luteinizinghormonereceptor，LHR）和促性腺激素释放激素受体（gonadotropinreleasinghormonereceptor，GnRHR）蛋白表达水平的变化。本研究获得如下主要结果：1、DEHP对卵巢细胞的毒性：DEHP染毒CHO细胞24h的IC50为612μmol/L，染毒48h的IC50为336μmol/L。DEHP较高

7、剂量（150μmol/L和300μmol/L）染毒条件下，凋亡基因Bcl-2mRNA表达水平相较对照组显著降低（p＜0.05或p＜0.01）；300μmol/LDEHP染毒条件下，caspase-8和caspase-9mRNA表达水平相较对照组显著升高（p＜0.05或p＜0.01）；300μMDEHP染毒条件下，p53和k-rasmRNA表达水平相较对照组显著升高（p＜0.05）；c-fosmRNA表达水平与对照组比较无显著差异。I邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究2、DEHP对雌

8、性大鼠卵巢的病理损害：DEHP染毒组大鼠卵巢重量和脏器系数相较对照组无显著性差异（p＞0.05）；普通光学显微镜观察卵巢的病理改变，DEHP染毒组均可见初级卵泡中卵母细胞核消失，DEHP中剂量组观察到卵泡闭锁，中剂量和高剂量组观察到卵母细胞周围的颗粒细胞发生排列紊乱和脱落的现象。透射电子显微镜观察卵巢颗粒细胞超微结构的改变，结果显示DEHP染毒组的颗粒细胞中出现线粒体结构异常、核染色质凝聚、形成凋亡小体等凋亡现象，DEHP高剂量组颗粒细胞出现变性坏死的病