肝细胞生长因子对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化调节作用的研究

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2、位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。攀躲叶一翳蒜中文摘要肝细胞生长因子对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化调节作用的研究摘要目的：肾间质纤维化是导致肾功能衰竭的主要决定因素。肾间质纤维化的发生发展是一个复杂的过程，涉及多种细胞因子及细胞内信号转导通路。肾小管间质病变及其严重程度往往决定着肾脏疾病的预后。因此，探讨肾小管间质纤维化的发病机制及防治措施具有重要的临床意义。转化生

3、长因子B1(TransforminggrowthfactorTGF．131)在多种纤维化疾病中均发挥强效的致纤维化作用。TGF．131通过促进足细胞、内皮细胞、小管上皮细胞及间质成纤维细胞产生大量的基质成份，．以及肾小管上皮细胞转分化，导致肾小球硬化及小管间质纤维化，最终发展成为终末期肾衰竭。活化素受体样激酶(ActivinReceptor．1ikeKinase)家族，属于丝氨酸／苏氨酸激酶，特别是ALK5对于活化的TGF。B1发挥其生物学活性至关重要。提示ALK5与慢性肾间质纤维化的发生发展密切相关。ALK5受体能够活化其下游的S

4、mad及P38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogenactivatedproteinkinaseP38MAP目信号通路，将TGF．B1信号传导至细胞内，促进细胞外基质(extfacellua姗atrix，ECM)沉积。肝细胞生长素(HepatocytegrowthfactorHGF)作为一种多效性因子，对于肾损伤后肾小管的修复与再生至关重要。HGF通过抑制TGF．61的表达；抑制成纤维细胞活化及细胞外基质的过度生成；加速细胞外基质降解；阻断肾小管上皮一肌成纤维细胞转分化；抑制细中文摘要胞凋亡；促进细胞增殖等方面，发挥肾脏保护作用。

5、注射用促肝细胞生长素(HepatocyteGrowth．promotingFactorsforInjection)是从动物肝脏中提取的小分子多肽类活性物质，目前主要应用于重症肝炎和早期肝硬化的临床治疗。迄今为止，国内外尚未见促肝细胞生长素对单侧输尿管钴手L(unilateralureteralocclusion，uuo)大鼠模型肾组织HGF、TGF．B1、ALK5表达影响的研究。本实验以UUO大鼠模型为研究对象，观察肾脏组织病理改变，并应用免疫组织化学方法检测HGF、TGF．131、ALK5的表达情况，同时应用促肝细胞生长素进行干预

6、，探讨肾间质纤维化中HGF、TGF．B1、AI，K5的表达变化及促肝细胞生长素对其影响，为临床防治肾间质纤维化提供试验性理论依据。方法：选择清洁级健康雄性Wistar大鼠54只，体重(200±10)克，随机分为三组：假手术组(正常对照组，A组)，单侧输尿管结扎组(uuo组，B组)，促肝细胞生长素干预组(C组)，每组各18只。每组又因于术后第3、7、14天分批处死而分为N3、N7、N14组，每组各6只。将B、C组大鼠以水合氯醛(O．1ml／kg)腹腔注射麻醉后，行左侧耻骨上切口，沿左肾下极寻找到左侧输尿管，在中上1／3处用4号线上下结

7、扎两处，然后从中剪断输尿管，以防逆行性感染。A组除不结扎和剪断输尿管外，其他手术过程同前。C组大鼠以促肝细胞生长素0．5mg／(Kg-d)腹腔注射，1次／日；A和B组大鼠用等容积生理盐水腹腔注射，1次／日，三组均于术前一天开始注射至术后第3天、第7天和第14天，实验期间自由进食水。术后第3天、7天、14天各组随机选取6只大鼠分三批颈椎离断处死，后立即取出大鼠左。肾组织，分别用中文摘要苏木素伊红(HE)、Masson染色，光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化，应用图像分析系统进行半定量分析。采用免疫组织化学方法测定肾间质HGF、TGF．B

8、1、ALK5的表达，结果应用图像分析系统进行半定量分析。实验结果均以均数±标准差(x±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析，组内比较采用t检验，应用SPSSll．5统计分析软件对实验数据进行统计学处理，P<0．05为有统计学意义。结