川芎嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

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1、中文摘要川芎嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用摘要目的：观察单侧输尿管梗阻(UU0)大鼠模型分化抑制因子l(Idl)蛋白与肾小管上皮细胞一间充质转分化(EMT)的关系以及川芎嗪对UUO大鼠肾间质纤维化是否有抑制作用，其肾脏保护作用的可能机制。方法：60只清洁级雄性SD大鼠，随机分为A组(假手术组)、B组(UUO组)、C组(川芎嗪组)、D组(厄贝沙坦组)，每组各15只。在无菌条件下行左侧输尿管结扎术，其中A组开腹后，分离出左侧输尿管，但不结扎，其余步骤相同。术前1日开始，C组给予川芎嗪混悬液40m1．kg-1．d。(腹腔注射)，D组给

2、予厄贝沙坦50mg．kg-1．d。(溶于适量生理盐水中灌胃)，A组和B组给予等量生理盐水灌胃，每目一次。在术后分别于第3、7和14天取出左侧肾脏后处死动物。取左。肾下极约1／3肾组织，垂直于肾门将肾组织分成3份，l份放入中性甲醛固定液中，l份放入FAA固定液中，余下组织迅速放入液氮灌中，尔后．80℃冰箱保存测荧光实时定量PCR(real—timePcR)。然后行石蜡包埋，分别用于马松染色(MASSON)、苏木素伊红染色(HE)、过碘酸一Schiff(PAS)染色及免疫组织化学染色。病理染色观察4组大鼠肾间质面积改变及肾间质纤维化的程度，炎症细

3、胞浸润与肾小管上皮细胞及管腔形态变化等。免疫组化法检测肾间质中转化生长因子一31(TGF．31)、Idl、小窝蛋白l(Cavl)、甜中文摘要平滑肌肌动蛋白(ot-SMA)、E．钙粘蛋白(E．cadherin)及I型胶原的分布与表达，并进行病理图象分析，计算阳性面积比率。采用单因素方差分析法分别在各时间点将4组作比较，并在一组内将同一时间点样本两两间进行t检验。并在B组内将免疫组化指标表达量变化进行相关性分析。应用SPSSS统计软件进行统计分析。荧光实时定量PCR检测各组肾组织IdlmRNA的表达。于术后各时间点评估肾间质纤维化程度及肾小管间质

4、损害程度。其中肾小管间质损害程度采用百分比评分法进行评估。结果：1肾组织病理及胶原含量的变化：肉眼观察B组术后，结扎侧肾脏肿大，肾盂。肾盏扩张，肾实质变薄。光镜示：B组随梗阻时间延长，肾脏逐渐出现肾小管扩张及萎缩，肾间质单核淋巴细胞浸润，由皮髓交界处开始逐渐出现间质纤维化，而肾小球无明显病理变化，与A组小管损伤程度及间质纤维化的程度同时间点相比均有统计学意义(pO．05)。2川芎嗪抑

5、制肾小管上皮细胞一间充质转分化：(1、)Idl、Cavl的表达：从术后第3天起，B组Idl蛋白及IdlmRNA的表达已明显增加，IdlmRNA表达于术后3天达峰，为：(0．044+0．0011)，且表达减少，至14天时降至(O．019士0．008)，而Idl蛋白表达于第7天达高峰，B组各时间点表达有统计学意义(p均O．05)。Idl蛋白的阳性面积与肾组织中Cavl的含量明显正相关，且两者均显

6、著表达于扩张，坏死的近端肾小管上皮细胞。A组Cavl于’肾小球囊壁层上皮细胞，B组术后3天近端小管上皮细胞表达明显升高，为：(16．05士4．768vs2．95+0．911)％(p

7、纤维细胞a-SMA表达阳性。UUO术后第3天起，B组Ecadherin的表达即开始下降，肾小管上皮细胞出现a-SMA表达，与A组差异有统计学意义(p0．05。(3)促纤维化因子(TGF．131)的表达：TGF一／31A组。肾小管偶有着色且不明显，B组术后其表达遍布于皮质与髓质损伤的肾小管，且表达量随小管损伤范围的增加及肾间质纤维化的加重呈明显升

8、高趋势。术后第3天，B组大鼠肾组织TGF．p1表达量较假手术组有明显增加，第14天达高峰。而治疗组大鼠肾组织各时间点TGF．／31表达量较B组明显减少，差异有统计学