树突状细胞对肿瘤特异性CTL体外激发、扩增及功能的作用研究

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1、树突状细胞对肿瘤特异性CTL体外激发、扩增及功能的作用研究夏瑜朱一蓓戴俊黄勇席泓吴明媛李文香张学光（苏州大学医学生物技术研究所，苏州215007）摘要：目的研究凋亡肿瘤细胞负载的DCs联合细胞因子对T细胞体外激发、扩增及功能的诱导作用。方法人B淋巴瘤细胞株Raji经顺铂（DDP）诱导凋亡，体外共育法负载DCs，DCs和T细胞体外共培养观察DCs对T细胞的效应，采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析T细胞表型；ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-10的含量；溶血实验检测细胞毒性T细胞（CTL）产生穿孔素的能力；体外肿瘤杀伤实验分析CTL的特异性肿瘤杀伤作用。结

2、果凋亡肿瘤细胞负载联合CD40激发的DCs能有效地激发自体T细胞的体外扩增并诱导具有较特异杀伤肿瘤细胞作用的CTL。结论凋亡肿瘤细胞负载的DCs在CD40信号的作用下对自体T细胞具有较强的激发和扩增效应，所获得的CTL对肿瘤细胞具有较特异的杀伤作用。关键词：树突状细胞;细胞毒性T细胞;肿瘤免疫;CD40中图分类号R730.59文献标识码ATheEffectofDendriticcellsontheProliferationandFunctionofTumorSpecificCytotoxicTLymphocyteXIAYu,，ZHUYi-bei，DAIjun，etal（B

3、iotechnologyInstitute,SoochowUniversity,Suzhou215007,China）AbstractObjectsToinvestigatetheeffectoftheapoptotictumorcells-loadeddendriticcellsassociatedwithdifferentcytokinesontheproliferationandbiologicalfunctionofautologousTcellsinvitro.MethodsHumanmalignantBcelllymphomacelllineRajiwasin

4、ducedapoptosis7bytreatingwith0.5mgDDP/10cell/mlfor3-4h.ThentheapoptotictumorcellswereusedtopulseDCs.CoculturingassayofDCsandTcellswassetuptoinvestigatetheeffectofDCsonTcells.PhenotypesofCTLwereanalyzedbyflowcytometry;theconcentrationofIFN-γandIL-10insupernatantofCTLwasdeterminedbyELISA;th

5、eabilityofCTLproducingperforinwasmeasuredbyhomolysismethod;T-cellcytotoxicitywasmeasuredbyMTTassay.ResultsTheapoptotictumorcells-pulsedDCsstimulatedbyagonisticanti-CD40mAbwerepotenttostimulateautologousTlymphocytesproliferationandalsoshowedaspecificandeffectivetoxicitytoallogenictumorcell

6、sinvitro.ConclusionTheapoptotic-tumorcellsloadedDCshaveefficientabilitytostimulatetheTcellstoproliferateandtheCTLswhichstimulatedhavehighanti-tumorspecificactivitiesinvitro.Itmaybeofgreatvalueintheadoptivetreatmentoftumor.Keywords:Dendriticcell(DC);cytotoxicTlymphocyte(CTL);tumorimmunolog

7、y;CD40机体的抗肿瘤免疫主要为T淋巴细胞所介导，但因受到肿瘤细胞本身及外在多种因素的影响，机体的肿瘤抗原特异性T细胞通常处于免疫耐受状态。因此进一步探讨如何有效激发机体的T细胞抗肿瘤细胞免疫应答是目前亟待解决的问题。大量的研究表明，树突状[1]细胞（DCs）是机体内最有效的专职抗原提呈细胞，以DCs为主体的细胞治疗在肿瘤免疫[2]治疗中具有重要的价值。本研究以凋亡肿瘤细胞负载、CD40mAb激发的DCs，联合细胞[3]因子IL-2、IL-15等体外激发扩增肿瘤特异性CTL，初步探讨CTL的生物学功能，以期为[3-4]肿瘤过