比较两类树突状细胞激活的肿瘤特异性ctl对肝癌荷瘤裸鼠的治疗作用

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1、比较两类树突状细胞激活的肿瘤特异性CTL对肝癌荷瘤裸鼠的治疗作用作者：张希国，师建国，刘彦仿，阎庆国【摘要】目的研究人外周血不同来源的树突状细胞（dendriticcells，DC）光镜形态学、细胞超微结构及体内外诱导抗肿瘤免疫反应的差异。方法联合应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白介素4（IL4）及肿瘤坏死因子（TNFα）从人外周血中培养出两类DC；人肝癌细胞系SMMC7721细胞的可溶性肿瘤抗原刺激两类DC；两类DC激活同源的T淋巴细胞；观察两类DC激活的T淋巴细胞分别抑制已接种于裸鼠的人肝癌细胞系SMMC7721移植瘤生长。结果细胞因子诱导的人外周血DC群

2、可见到两类DC亚群：一类可能来自DC前体细胞，另一类是由单核细胞分化来的DC；两类DC体外激活的T淋巴细胞能分别抑制肝癌细胞系SMMC7721裸鼠移植瘤生长。结论细胞因子诱导的人外周血DC群存在多相性，两类DC亚群体内外诱导的抗肿瘤细胞免疫反应不仅能抑制肝癌细胞系SMMC7721裸鼠移植瘤发生，而且抑瘤率不同，提示两类DC亚群在肝癌的治疗中发挥着不同的作用。【关键词】树突状细胞；肝癌；肿瘤免疫；裸鼠AntihepatocarcinomaTherapeuticalEffectofTumorSpecialCTLActivatedbyTa；Tumorimmunity；Antitu

3、morvaccine树突细胞(dendriticcells,DC)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞(antigenpresentingcells,APC)，可以在体内外向T淋巴细胞提呈抗原，并诱发CTL(细胞毒T淋巴细胞)反应。选择人外周血体外培养富集DC是研究DC的重要途径，但所面临的困难是DC在外周血中含量极微，而且DC的多源性和多功能性尚待进一步阐明。本实验我们借助于细胞因子诱导体外培养富集人外周血含量达70%～80%DC群，经形态学鉴定为两种DC群。体外分别诱导出针对肝癌细胞抗原的特异性，并用于荷瘤裸鼠的治疗以观察其抑瘤率的效果。1材料与方法1.1材料重组人粒细胞巨噬细

4、胞集落刺激因子（rhGMCSF），重组人白细胞介素4（rhIL4）、CD86(Sigma公司），重组人肿瘤坏死因子（rhTNFα）（校肿瘤研究所馈赠），淋巴细胞分离液（上海华精生物科技有限公司），RPMI1640、新生小牛血清（杭州四季青公司），MTT（华美生物工程公司），5周龄雌性BALB/c裸鼠[中国科学院上海实验动物研究所，动物饲养及实验在校实验动物中心（SPF级动物实验室）完成]，健康人外周血（附属医院输血科）。1.2方法1.2.1DC的体外培养及收集据2.3两类DC亚群活化的淋巴细胞对肝癌细胞的特异性杀伤负载肝癌SMMC7721细胞可溶性抗原后两类DC亚群活化的

5、T细胞，对SMMC7721细胞、hepG2细胞均有不同程度的杀伤作用，见表1，杀伤效果明显高于非特异性淋巴细胞对照组且由B群DC活化的CTL2治疗组的杀伤效果高于由A群DC活化的CTL1治疗组的杀伤效果。2.4肝癌荷瘤鼠模型的建立在接种后的7天内15只裸鼠全部长出肿瘤，荷瘤鼠平均重量变化及肿瘤平均重量，见表2。2.5两类DC亚群诱导的肿瘤抗原特异性CTL1、CTL2对荷瘤裸鼠模型的治疗作用观察以被激活的CTL治疗裸鼠已生长出的SMMC7721移植瘤，接种后的第35天对照组、A群DC诱导的CTL1治疗组及B群DC诱导的CTL2治疗组裸鼠的体重变化、移植瘤的重量变化、及抑瘤率，见表

6、1。其生长曲线，见图3。结果显示与对照组相比，CTL1治疗组及CTL2治疗组移植瘤生长均受到不同程度抑制（P＜0.05，P＜0.01）。在两治疗组中，CTL2治疗组移植瘤生长受到抑制更明显（P＜0.05）。3讨论鉴于DC是免疫系统中一类最重要的抗原提呈细胞（APC），在启动T细胞免疫应答和T细胞依赖性应答中起关键作用，近年来对DC的临床研究愈来愈令人瞩目[24]。我们观察到人外周血PBMNC经移弃大部分T细胞后，再于RPMI1640完全培养液中继续培养24h获取贴壁单核细胞CD14+，经细胞因子联合刺激培养获取的DC群变为CD14并诱导分化为两类DC亚群，借助于透射电镜观察到

7、，从A、B两组人外周血富集的DC群（尤其是B组DC群）中相当一部分DC的胞膜和胞浆近膜侧有许多清晰可见的溶酶体，显示DC具有饱饮活性，这可能提示B组DC群抗肿瘤的能力更强。单核巨噬细胞和DC具有高度的派生、表型、功能和分子可塑性，它们源自骨髓中共同的多能造血祖细胞[5]。有