树突状细胞对裸鼠结肠癌移植瘤的抗癌效应

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1、树突状细胞对裸鼠结肠癌移植瘤的抗癌效应：贺子彪，杨伟明，焦保庭，宋辉【摘要】目的研究结肠癌患者外周血树突状细胞(DC)体外诱导后在裸鼠体内的抗癌效应。方法通过皮下移植法建立裸鼠模型，按治疗次数分为对照组、治疗组和加强组；从患者外周血中分离并培养出DC，以肿瘤抗原和金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)刺激DC；DC激活同源T淋巴细胞；DC激活的T淋巴细胞经用该患者结肠腺癌细胞建立的裸鼠模型的尾静脉注入，观察成瘤时间、肿瘤生长情况、移植肿瘤大小及裸鼠摄食、活动状况。结果成功建立结肠癌裸鼠模型。肿瘤接种第60天，对照

2、组、治疗组及加强组肿瘤大小分别为(3899±22)mm3、(1301±16)mm3、(392±18)mm3。与对照组相比，治疗组及加强组移植瘤生长均受到抑制(P=0.000)；与治疗组相比，加强组移植瘤生长抑制更明显(P=0.000)。结论同源结肠癌患者外周血DC和T淋巴细胞共孵后能抑制裸鼠体内移植瘤的生长。这有可能为肿瘤治疗提供一种新的方法。【关键词】树突细胞；结肠癌；免疫疗法；裸鼠；抗癌ABSTRACT:ObjectiveTostudytheimmuneresponseofdendriticcells(

3、DC)modifiedorantigenandSEBtotransplantedtumorinnudemice.MethodsNudemicemodelsancoloncancercellsinoculatedsubcutaneously,groupedintocontrolgroup,therapygroupandretherapygroup;DCPBMCofcoloncarcinomapatienttoactivateTlymphocyteodifiedbytumourantigenandSEB.The

4、Tlymphocyteplantedtothemodelstoinhibitthegroplantedtumorthroughtailvein.Tumorformation,groicefeedingandactivitystatusormodelofhumancoloncarcinomainnudemiceicefor60days,volumeoftransplantedtumorinthecontrolgroupm3,therapygroup(1301±16)mm3,andretherapygroup(

5、392±18)mm3.paredorintherapygroupandretherapygroupcouldgroorgroeobviouslyslomuneresponseinducedbyDCcaninhibitthegroorinnudesmice,ayprovideaneor.KEYI1640＋10%FCS)[6]。1.6培养和鉴定DC，激活T淋巴细胞收集分离T淋巴细胞步骤中的黏附细胞，加DC培养液[细胞培养液+100μg/L粒巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)+10μg/L白细胞介素4(IL

6、4)]，37℃、5%(体积分数)CO2、100%湿度的细胞培养箱内培养，每2d更换半量新鲜DC培养液，培养至第5天加入肿瘤抗原(按肿瘤细胞数与DC数比例为3∶1)和金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)(100μg/L)。修饰36h后将其与T淋巴细胞按1∶100的比例置37℃、5%(体积分数)CO2、100%湿度的细胞培养箱内再培养36h，即得本研究所需的效应细胞。其中黏附细胞培养到第5天和第7天(修饰前后)，各取细胞5×105个，用FCM分析其表达DC特异分子CD11c、CD80、HLADR的情况，并取修饰

7、后的细胞做电镜观察[6]。1.7统计学处理实验结果以均数±标准差(±s)表示。应用SPSS13.0软件行方差分析和t检验，以P<0.01为差异有统计学意义。2结果2.1三组裸鼠模型移植瘤的生长状况对照组10只中有8只在第8天见米粒大少的皮下肿瘤长成，肿瘤生长较快；治疗组与加强组共20只中14只在第16天，才见米粒大少的皮下肿瘤出现，肿瘤生长慢，加强组注射T淋巴细胞后持续1周左右，移植瘤生长明显平缓。到实验结束，裸鼠活动及饮食未见明显异常，各组移植瘤呈结节性膨胀性生长，未见移植瘤周围及其他部位明显转移病

8、灶，无裸鼠死亡。实验结束后取肿瘤制片行HE染色及CEA、CK20等免疫组化法再次检验，均呈阳性[5]。2.2T淋巴细胞对移植瘤生长的抑制作用肿瘤接种第60天，对照组、治疗组及加强组肿瘤大小分别为(3899±22)mm3、(1301±16)mm3、(392±18)mm3。与对照组相比，治疗组及加强组移植瘤生长均受到不同程度抑制(P=0.000)；与治疗组相比，加强组移植瘤生长抑制更明显(P=0.000，图1～图3)