抗原冲击树突状细胞介导CTL特异性抗白血病作用的体外研究

《抗原冲击树突状细胞介导CTL特异性抗白血病作用的体外研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要目的：研究白血病患者骨髓来源的单个核细胞体外诱导为树突状细胞的有效方法；观察不同途径来源的白血病抗原冲击树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞特异性的抗白血病效应，为急性髓性白血病免疫治疗提供理论依据。方法：lo例急性髓性白血病患者骨髓经淋巴细胞分离液分离单个核细胞，予重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(GM．CSF)、钙离子载体A23187联合培养6天诱导分化为树突状细胞；分别用弱酸洗脱法提取单个核细胞MHC。I类抗原肽以及用0．4％KClf氐渗法提取的白血病抗原，冲击树突状细胞，形成负载抗原的AML．DC；抗原与树突状细胞共培养6天后与正常

2、人外周血分离的、经IL．2培养的T细胞共同培养，生成特异的细胞毒性T淋巴细胞；采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)比较不同方法产生的CTL细胞对急性髓性白血病细胞的杀伤活性。用倒置显微镜观察AML．DC诱导前后形态学变化，用流式细胞仪检测急性髓性白血病细胞诱导前后CDl”CD83表型变化以及刺激T细胞后其CDl52的表达。结果：白血病患者骨髓来源的单个核细胞经过100ng／mlGM．CSF、500ng／ml钙离子载体A23187成功诱导为树突状细胞，倒置显微镜下观察具有典型的树突状细胞形态；其CDl伐、CD83表达诱导前分别为1．164

3、-0．15％、7．28+0．21％，CD83诱导后48h最高，达59．69+2．56％，较诱导前差别有统计学意义，以后逐渐降低，CDla则在96h达最高，较诱导前明显升高，有统计学意义；弱酸洗脱法获得的抗原肽冲击树突状细胞致敏T细胞后杀伤白血病细胞的能力最高，为76．654-12．62％，未负载抗原的树突状细胞致敏T细胞后杀伤白血病细胞的能力为29．634-5．49％，两者存在显著性差异(P<0。01)，空白对照组最低，为10．274-2．84％。结论：急性髓性白血病患者来源的骨髓单个核细胞经GM—CSF、钙离子载体A23187能够成功

4、诱导为树突状细胞；弱酸洗脱法获得的抗原肽冲击树突状细胞致敏T细胞能够获得更强的杀伤白血病细胞的能力。关键词：白血病；树突状细胞；细胞毒性T淋巴细胞；钙离子载体IIAbstractABSTRACTObjective：Toexploretheeffectivemethodforcultureofthedendriticcellsfrombonemarrowmononuclearcellofacutemyelocyticleukemiapatientandthespecificanti-leukemiccelleffectmediatedby

5、dendriticcellspulsedwithacutemyelogenousleukemiaantigeninvitroandtoprovideatheoreticbasisofAMLimmunotherapy．Method：Bonemarrowmononuclearcellsisolatedwithlymphocytesseparationmediumfrom10casesofAMLpatientswereculturedwithrecombinategranulocyte-macrophagecolonystimulatingf

6、actorandcalciumionophoreA23187for6-daytoinducetodendriticcells．InduceddendriticcellswerepulsedwithmajorhistocompatibilitycomplexclassIpeptidesisolatedbyacidelutionassayandacutemyelogenousleukemiaantigenisolatedbydestroyassaywithO．4％KCl．respectively．AftertheAML-DChadbeenp

7、ulsedbytheAMLantigenfor6-day,theywerecoculturedwithTlymphocytederivedfromhealthyperipheralbloodwhichhadbeenculturedwithIL一2for7daystoproducingcytotoxicTlymphocyte．Then，thedifferencesoftheinhibitionratioofCTLproducingwithdifferentmethodtoAMLcellswerecomparedbymethylthiazo

8、lyltetrazolium(MTT)assay,themorphologychangesofAML-DCwereobservedwithinvertedmicroscope，thephenotypecha