自发性高血压大鼠左室心肌α烯醇化酶的表达调控及其生物学功能初探

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1、上海交通大学博士学位论文自发性高血压大鼠左室心肌α-烯醇化酶的表达调控及其生物学功能初探姓名：朱理安申请学位级别：博士专业：老年医学（心血管病）指导教师：方宁远;何奔20080401上海交通大学医学院博士学位论文自发性高血压大鼠左室心肌Q一烯醇化酶的表达调控及其生物学功能初探摘要高血压左室肥厚(LVH)是高血压病的主要并发症之一，是心血管事件的独立危险因素，近年来受到高度重视。流行病学资料显示高血压合并LVH易发生心血管事件和猝死，其病死率较无LVH者增加8倍。在原发性高血压(EH)患者中，LVH的发生率达20％．

2、60％，但其形成机制至今尚未完全阐明，治疗方法和效果也不尽理想。近10年来，随着蛋白质组学的兴起及其研究策略的发展，使得疾病相关蛋白质的高通量分析成为可能。我们在前期的研究中利用双向凝胶电泳一质谱这一技术成功筛选到多个在SHR大鼠肥厚心肌中异常表达的蛋白，其中仅．烯醇化酶(0L．enolase)表达明显增加，然而u．enolase蛋白表达何时开始升高、为何升高、如何升高以及它是否参与了高血压左室肥厚的过程仍不清楚。本研究从基因的转录和翻译水平对前期的二维电泳的结果进行了验证并进而探讨其与血压、神经内分泌因子(血管紧

3、张素II、内皮素．1)以及左室肥厚之间的关系。结果发现4周龄SHR大鼠已出现左室肥厚，而此时血压尚未升高，提示心脏后负荷(血压因素)与早期肥厚关系不大，而神经内分泌因素可能是早期肥厚的主要影响因子。值得一提的是在左上海交通大学医学院博士学位论文室肥厚还未出现前，也就是1周龄时，SHR大鼠心肌仅一enolase蛋白的水平已明显高于同龄WKY组(差异有显著性，P<0．05)。这就引出了一个重要的问题：是否Ⅸ．enolase的这种变化参与了细胞肥大的过程抑或这种变化仅仅是SHR大鼠的一种遗传特性?由于我们在对心肌组织内皮

4、素．1水平的检测过程中发现从生后第l天起，SHR大鼠心肌组织的内皮素．1水平就较同周龄的WKY大鼠高，而二者的心肌组织血管紧张素II水平在8周龄以前却无明显差异，这也促使我们去进一步探讨内皮素．1与O【一enolase表达之间的关系。通过建立内皮素-1(ET-1)诱导的心肌细胞肥大模型，并对肥大细胞中细胞外信号调节激酶(ERK。，：)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p—ERK，／：)、低氧诱导因子(HIF一1Q)，Ct一烯醇化酶(Q—enolase)蛋白的免疫印迹检测发现ET一1刺激后心肌细胞有ERK。，：的活化，即p

5、-ERK。／：的表达；ERKm抑制剂PD98059在抑制ERKl／2活化的同时也部分抑制了HIF-1Q，Q-enolase蛋白的表达，并且抑制了细胞肥大反应的发生。提示ERK眈的活化与ET-1诱导的细胞肥大关系密切，在ET—l促心肌细胞肥大过程中，MAPK／ERK。／：一HIF一1Q信号通路的激活，参与了Q—enolase高表达的调控。为了对Q．enolase的生物学功能进行研究，我们采用RNA干扰技术抑制培养大鼠心肌细胞Q．enolase的表达，并通过荧光素．荧光素酶法检测细胞ATP水平，视频跟踪计算机测定系统测

6、定细胞收缩反应，参数包II上海交通大学医学院博士学位论文括最大收缩幅度(dL)，最大收缩速度(dL／dtmax)。初步探讨了Q．enolase对心肌细胞能量产生和收缩功能的影响。结果发现Q—enolase表达下调后细胞ATP产生减少，收缩幅度(dL)、最大收缩速度(dL／dtmax)下降。最后我们建立了利用蛋白转导载体Charoit将外源Q一烯醇化酶导入心肌细胞的方法，为后续的蛋白功能研究奠定基础。【关键词1高血压，仪一烯醇化酶，心肌细胞，肥大III上海交通大学医学院博士学位论文THEEXPRESSl0NANDRE

7、GULATIoNMECHANISMoFALPHA．ENoLASElNTHELEFTCARDIACVENTRICLESoFSPoNTANEoUSLYHYPERTENSIVERATSANDTHEINITIALRESEARCHoNITSBIoLoGICALFUNCTIoNABSTRACTLeftventricularhypertrophy(LVH)isoneofthemaincomplicationsofhypertension．Ithasbeendemonstratedasanindependentriskfactor

8、ofcardiovascularevents．MaladaptivecardiachypertrophyCanprogresstocongestiveheartfailure，aleadingcauseofmorbidityandmortality．Epidemiologicalevidencehasdemonstrateda20％一60％prevalenc