大豆、榨菜的组织培养及遗传转化研究

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1、浙江大学硕士学位论文大豆、榨菜的组织培养及遗传转化研究姓名：胡小祥申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：郭得平2003.5.1摘要本论文研究了大豆的离体再生和根癌农杆菌介导的遗传转化及榨菜的离体培养。大豆子叶、下胚轴培养在不同激素的B5培养基中，只能诱导出愈伤组织，难分化芽。但子叶节却能诱导出丛生芽，在2mg，LBA+0．2m∥LIBA的B5培养基上再生频率达41．9％。以榨菜子叶、真叶为外植体进行离体培养．用BA、CPPU、TDZ和KT等细胞分裂素和生长，素NAA、lBA组合诱导子叶、真卅再生不定芽试验。黠果表明．供试细胞分裂素中，诱导活性大小l为TDZ>CPPU>BA>KT，BA、C

2、PPU、TDZ和KT诱导子叶不定芽再生的最佳浓度分别为4、0．4、1、15m∥L。1mg／LTDZ和lm∥LNAA配合对子叶再生具有极强的诱导作用，再生率最高，达到67．9％，平均每外植体不定芽数达35个。在培养基中添加AgN0，对子叶离体再生有明显促进作用，以8mg／LAgN03的效果最好-再生频率达56．7％，比对照提高了234％。对子叶、真叶、下胚轴、根系四种外植体在附加1m∥LTDZ+05mg／LNAA的MS培养基上的再生能力进行了比较，发现子叶再生频率最高．真叶次之，下胚轴只分化愈伤组织，少数分化出绿色芽点，根系最差，既不能分化愈伤，也不能分化芽。y通过从重组质粒pBll21上切

3、下s基因(连同35S启动子)片段，将该片段定向克隆到DCAMBIAl305I质粒的多克隆位点HindllI、BamH【之间．构建了一种植物表达载体。经双酶切鉴定证实s基因克隆到载体pCAMBIAl305．I上，用三亲交配法将重组克隆导入根癌农杆菌EHAl05，获得了含pCAMBIAl305．1重组质粒的EHAl05根癌农杆菌菌株。通过根癌农杆菌介导对传染性支气管炎病毒纤突蛋白S基因在大豆中的遗传转化进行了研究。以子叶节为外植体，在抗性筛选培养基上大多白化死亡，有少数生长出芽，转化频率最高为67％关键词：大豆；根癌农杆菌：遗传转化：植株再生：榨菜√／√、，、AbstractTissuecul

4、tureofsoybean‘G如inegl'lagL)andstemmustard(Brassicaj．nceaMao)InvitroandgenetictransformationofsoybeanbyAgrobacteriumtumefacienswerestudiedinthisexperiment．Tobuildanefficientsoybeanregenerationsystem，thefactorsaffectingsoybeanregenerationweretested．Fromtheresults，thehighestfrequencyofregenerationwas

5、achievedonB5mediumsupplementedwith2mg／L6-benzyladenine(BA1and0．2mg／Lindole‘3_butyricacid(IBA)．CotyledonandtrueleavesofstemmustardwereculturedonMSmediumsupplementedwithdifferentconcentrationsofvariouscytokinins(BA、CPPU、TDZorKT)aloneorincombinationwithNAAorIBA，andtheadventitiousbudsregenerationratew

6、asevaluated～TheresultshowedthatthecytokininabilityinshootinductionwasinorderofTDZ>CPPU>BA>KT,andtheoptimalconcentrationofBA、CPPU、TDZ、KTforbuddifferentiationoncotyledonwas4m∥L、0．4m∥L，1mg／L，1．5m∥Lrespectively．AdditionofImg／LTDZand1mg／LNAAresultedinthehighestbudregenerationrate(67．9％)andnumber(35)ofb

7、udsperexptant．RegenerationratecouldbeimprovedapparentlyinthemediumwithAgN03．Itwasobservedthatregenerationrateofcotyledonwashighestwhenregenerationabilityofcotyledon、trueleaf．hypocotylandrootwerecomparedHowever，on