常山酮抑制电离辐射导致的肿瘤细胞上皮间质转化EMT的机制研究

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1、分类号：R730．55密级：学位类别：科学学位团专业学位口学校代码：1062学号：2010602527学科门类：医学夭肄眚科^母硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：常山酮抑制电离辐射导致的肿瘤细胞上皮间质转化(EMT)的机制研究TITLETheMechanismstudyontheinhibitioneffectofHalofuginoneonTumorCellEpithelial—MesenchymalTransitionInducedbyIrradiation一级学科：临

2、床医学二级学科：肿瘤学放射治疗学论文作者：姬凯指导教师：王平教授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：彳虬日期：扣仔年f月2牛日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定

3、，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密匣r。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：袒堑乙日期：bf了年r月z十日、／导师签名：—』二』垒日期：≯。哆年f月2印天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：研究常山酮对放疗所致肿瘤细胞上皮间质转化(Epithelial—MesenchymalTransition，

4、EMT)的抑制作用，并探讨其可能机制。方法：采用MTT法观察常山酮乳酸盐对LLC细胞的毒性，确定合适给药剂量。选用LLC细胞为研究对象，观察常山酮对电离辐射所致的肿瘤细胞EMT的抑制作用。将LLC细胞分为4组，对照组不做任何处理；单纯常山酮组予含恒定浓度常山酮乳酸盐的全培养基培养并持续给药至下一步实验开始；单纯照射组予单次10Gy剂量的6-MVX线照射；联合组先予常山酮全培养基培养细胞，1天后予单次10Gy剂量的6-MVX线照射，细胞培养期间保持培养基内常山酮浓度恒定。采用免疫印迹法分别检测照射后2天

5、及5天时4组细胞的P-Smad3判断TGF．B信号传导通路激活情况，确定进一步实验的时间点。通过显微镜观察、划痕实验及Transwell侵袭实验检测4组细胞形态学、迁移及侵袭能力的变化。利用免疫印迹法检测电离辐射及常山酮对LLC细胞EMT标志物、TGF-p信号传导通路下游相关蛋白(P—Smad2、P．Smad3和Smad7)的变化。结果：通过24、48h的MTT实验绘制常山酮乳酸盐对LLC细胞的抑制曲线并计算出48h时常山酮乳酸盐对LLC细胞抑制20％时的浓度为31．17n∥ml。单纯照射组LLC细胞

6、表达的P—Smad3蛋白水平在照射后5天时较照射后2天时明显升高，故进一步实验的时间点选择为照射后5天时。照射后5天时与空白对照组比较，单纯常山酮组划痕伤口愈合面积减少，Transwell小室穿膜细胞数明显减少，同时上皮标志物E．Cadherin表达升高，问质标志物N—Cadherin表达降低；与空白对照组比较，单纯照射组细胞极性消失，并向纺锤样问质细胞形态演变，划痕伤口愈合面积明显增多，Transwell小室穿膜细胞数增多，同时上皮标志物E．Cadherin表达降低，问质标志物N—Cadherin表

7、达升高；联合组较单纯照射组问质细胞形态被逆转，划痕伤口愈合面积减少，Transwell小室穿膜细胞数亦明显减少，同时上皮标志物E—Cadherin表达升高，问质标志物N．Cadherin表达降低。TGF．131信号传导通路相关因子检测发现，单纯常山酮处理后的LLC细胞Smad2及Smad3蛋白的磷酸化水平较空白对照组明显下降，Smad7蛋白表达较空白对照组明显升高；10Gy单次照射后LLC细胞的Smad2及Smad3蛋白的磷酸化水平较空白对照组明显升高，Srnad7蛋白表达较空白对照组明显降低；而联合

8、组LLC细胞的Smad2及Smad3蛋白的磷酸化水平较单纯照射组明显下降，天津医科大学硕士学位论文Smad7蛋白表达较空白对照组明显升高。结论：常山酮可以抑制电离辐射所致的肿瘤细胞EMT，其可能作用机制是通过抑制肿瘤细胞内TGF—B信号传导通路来实现的。关键词：常山酮上皮间质转化转化生长因子一13电离辐射天津医科大学硕士学位论文Abstractobjeetive：Toinvestigatetheinhibitioneffectofhalofuginone