酪氨酸酶基因体外细胞转染的MR评价

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1、中山大学博士学位论文酪氨酸酶基因体外细胞转染的MR评价姓名：元建鹏申请学位级别：博士专业：影像医学与核医学指导教师：梁碧玲2003.4.28酪氨酸酶基因体外细胞转染的MR评价——中文摘要酪氨酸酶基因体外细胞转染的MR评价专业名称：影像医学与核医学博士生：元建鹏指导教师：梁碧玲教授摘要前言I／基因治疗是医学科学研究的前沿领域，在近十多年来获得了非常迅速的发展。多种单基因遗传病以及恶性肿瘤、高血压、冠心病、糖尿病、AIDS等多基因病均成为基因治疗的研究对象，部分研究已从细胞培养和动物实验阶段进入临床试验，并取得了令人鼓舞的成效。目前基因治疗的主要方法包括缺失基因的补充、缺陷基因的替换、有害基因的

2、抑制、自杀基因的引入等，其中涉及的最根本的技术就是基因转染的成功实施及表达。迄今为止，已建立了众多基因转染的方法，既包括生物学的方法，也包括非生物学的方法，但是，基因转染的评价方法仍然难以令人满意。目前使用的都是创伤性的方法，免疫组化、组化及原位杂交均需要经过活检或尸解才能得到的组织样本。无创伤的基因转染评价方法的研究才NtJFjI]开始，还有许多问题有待解决。要成功地在体内进行基因转染的显像，必须满足如下四个条件：1．高亲和力的分子探针，并对它在体内的生理代谢过程已有相当的了解：2．有效的运输途径，可高效率地运输分子探针进入靶器官；3．合适的放大信号的方法；4．敏感、快速且分辨率高的成像手

3、段。目前已有数以十计的显像方法，部分己能够进行体内显像。目前研究的分子探针概括起来分为两类，一类为编码酶的基因，包括胸苷激酶、胞嘧啶脱氨酶、酪氨酸酶、13半乳糖核苷、精氨酸激酶、荧光素酶、组织蛋白酶；另一类为编码细胞表面受体的基因，包括：转铁蛋白受体、胃泌素释放肽受体、生长抑素受体、多巴胺一2受体、溶解多肽等。应用的主要影像技术包括：核医学成像、磁共振成像、光学成像。核医学成像应用得最早，也是目前应用最多的。它的敏感性高，但空间分辨率不高；磁共振成像的敏感性低于PET，而空间分辨率高(在体外实验中可分辨的像素体积达10um3，在体内实验中可分辨的像素体积约为50“ms)；早期的光学成像仅能用

4、于透明的器官或较表浅的部位(深度小于2mm)，最近已有采用断层成像的方法，通过组织蛋白酶的活化来使熄灭的荧光恢复发光从而检测位于内在器官的特异蛋白酶。三种方醚懿酸酶基麓俸舞缩jj整转涤豹MR评徐——中文攮瑟法各裔谯跤赢，分嬲铃辩不煎熬辩凌袋，备鸯箕逡台斑瘸瓣藏澄，需赞穰据磷究懿嚣魏避行遗撂。在基弱除段藏糖曼豫方法潺处予菠鼹的旱麓，识寄诲多方黼霭要改遗。一方蔼霈娶寻拽褥簿瞧麓、僖母强、骥焉蕊羽广的澎豫分子搽镑；勇一方灏霰鞭避一步改避影像方法抟敏感瞧颡窆瓣努凝窭；效髓强大瓣傣譬藏太方法硬靶随。陵好、转染效率惑蕊蒸缀转移技术瞧怒阉移震瑟避一多霹突熬。簌鞫羚，这方蕊灏繇究开瓣鹈较举，涟聪亦羧莰，鼗翡

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7、转粢＼＼(1)接种5X105细胞于10cm皿中培养至60％融合。_(2)在超净工作台上准备转染混合液：溶液A分别含5ug、1011g、20Itg质粒DNA，溶液B分别含Gene．SHUTTLE4o脂质体25ul、50ul、100ul。溶液A、溶液B的体积均为800ul。(3)轻轻混匀对应的A、B溶液，置室温下孵育45分钟使之形成DNA一脂质体复合物；(4)在加入6．4ml无血清和双抗的培养基到每个培养皿后，逐