bgιⅠ基因和cbhⅡ基因的克隆及玉米再生体系的建立

《bgιⅠ基因和cbhⅡ基因的克隆及玉米再生体系的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、东北农业大学硕士学位论文bgιⅠ基因和cbhⅡ基因的克隆及玉米再生体系的建立姓名：张彬彬申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：朱延明2003.5.1摘要f畜牧业是黑龙江省的半麟江山，进行饲草改良和撮黼饲料作物的吸收举是当前发展畜牧娃垂篙瓣决豹润越。玉米建重要的镯用蓐耪，在畜牧婕孛占毒支柱遮搜。毽由于其中禽商大量的纤维素，影响了草食性动物对它的消化率和吸收率。迄今，为提高对纤维的消化举和吸收攀，将纤维素酶作为添加剡应用于饲料工业，取得了一定成就，但仍存在着诸多

2、’薅邃，如终维素簿静生产营撩产酶蠢低、酶铡赉l在燕工j遣程串荔失活、酶售《

3、翔静藏零较裹替。低涅、干旱、盐碱等逆境条{字严熏制约着熬龙江省的农业生产，仅盐碱地就达9000万甯，培育出耐低温、干旱、盐碱的饲荜作耪，可充分利用我省的耕地资源，对我省的畜牧业发展将会起到重大作用。阁此，培育耐低温、干旱、盐碱以及高消化率的转基因饲料作镌，霹截选匿太熬经济帮享主会效蓥。夫一工本研究的目的是系统探讨提高玉米再生效率的主要因子，建虚稳定的玉米植株再生体系；克隆B一葡萄糖替酶基因(bgll)和藏聚糖辨切酶蒸困(cbhll)，弗分别将其构建在含脊对抗渗透胁迫基因起调控作用的转泶因子--DREBL4纂因的植物表达载体上，为后期利

4、用农杆菌介导法将编码纤维索酶的基因分别和DREBlA基因联合导入玉米中做准备，并为壤骞耐低滋、干旱、盐碱熬舞瀵纯率静饲弼玉米瑟瑟静<系)羹定基疆。，／主要研究结果如下：I1。。基蠢竟蓬(1)利用PCR方法，用GenBank上1993年注册的13-葡萄糖苷酶基因的特异性引物，从里氏零霉瓣蘩鬻组DNA孛亮醚了8一饕旃糖营酶蒺困(bglI)。彦确分析结暴袭锈，该序列与GenBank上的核苷酸序列同源性达99．9％，氨基漩序列同源性达99．9％。(2)剥髑PCR方法，用GenBank上1987年涟瓣静蘩聚耱乡}切瓣基霆貔特鼻性；

5、麴，从里氏术

6、霉的基因组DNA中克陵了葡聚耱外切酶蒸因(cbhlI)，序列测定正在进行中。2．载体掏建构建了中间表达载体pAHG。pAHG带有玉米组成型启动予Ubi调控的8．葡萄糖苷酶基因靼Amp基因选撵褥记。3．玉米再生体蔫建立f1)荔嚷ll篷惫伤缭媛诱导懿《个主葵因素静奎次鬏彦燕：2，4-D>BA)o腑妻[酸’水解酪蛋白·试验较优组合为{N6培养熬添加4mg／L2，4．D、0．25m龇BA、750mg／LL—麓氨骥、250mg／L承瓣稳蛋自。V末北农业大学理学硕士学位蜍文f2)确定了最佳IJ型愈伤组织诱导培养基为：N6+4mg／L2,4-D+0

7、．25mg／LBA+750mg／LL-躺氨酸+250rag／L+窳解酪鬣鑫+250mg／L谷氮蕺驶+t0mg／LAgN03，309／L蔗糖，0．8％琼脂，pH5．8(3)确定了继代培养纂为：N6+2mg／L2,4-D+0．25mg／LBA+750mg／LL-脯氨酸、+250mg／L采殡懿蛋鑫，309／L蔗糖，O。8％璩耩，pH5．8。适弩地降祗2,4-D豹浓度为了保持愈伤组织胚性的同时，不影响不定芽的分化。(4{不同基爨型数不是芽分他搴窝分诬效率不圜。在供试懿3个基隈型孛，禚1、龙抗11和东8112的不定芽分化率分别为89．970,4

8、、74．92％、38．53％，分化效率分别为113．37％、102．93％和69．12％。(5)确定了备基因型的不定芽努纯墙弊萋。甜1静分化培养蒸为MS+2mg／LBA+0．5mg／LNAA，309／L蔗糖，0．8％琼脂，pn5．8。诧抗11的分化培弊基为MS+0．2mg．／LBA+500mg／L永瓣聚爨骞t309／L蔗糖，O．8％璩聪，球5。S。东8112的分化培养基为MS+2mg／LBA+0．2mg／L2,4一D，309,L蔗糖，O．8％琼脂，pH5．8。(6)确定了生根培养纂为：MS+2mg／LNAA+O．25mg／LBA+0。

9、1％瓣性炭，309／L蔗糖，O．8％琼指，pH5．8。(7)不定芽分化阶段双丙氨膦的选择压力确定为：东8112为1．0mg,'L，龙抗11为1．25mg／L，差}}1楚1．5mg／L。?严～一美键词玉米；再生俸系；纾维素酶；基因克潼：载体鞠建，VIAbstractStockraisingplaysaveryimportantroleinHeilongjiangProvince．Improvingfeedstuffanditsabsorptionrateareurgentproblemsatpresentinstockraising．M

10、aizeasanimportantfeedstuffisofvitalconcernmentinStockraising．Becauseitcontainsalargequantityofcellulose，thedig