725杨再生体系的建立及转bt基因的研究

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1、安徽农业大学硕士学位论文725杨再生体系的建立及转Bt基因的研究姓名：汪玲申请学位级别：硕士专业：园林植物与观赏园艺指导教师：项艳201205摘要杨树是重要的速生轻工业原材料，在保护和维持生态环境上发挥着重要作用。因此，杨树林种植面积的正在逐年的增加，而杨树虫害却严重制约着杨树林的发展。美洲黑杨725杨(尸印砌岱沈加豇加以‘725’)的具有优良的耐水淹能力，适合种植于安徽淮河以南地区。苏云金芽孢杆菌∞c砌裕历w确咖郴妇，Bt)晶体蛋白具有特异性杀虫的功能，利用基因工程技术将苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因导入到杨树中去，这不仅提高杨树的抗虫性，也降低了因化学药剂的过量使用而对环境

2、造成的污染。本实验选用了美洲黑杨725杨的叶片作为外植体，对其进行高效的再生体系建立。同时将含有Bt基因的质粒导入到根癌农杆菌LBA4404中，利用农杆菌介导法将抗虫基因导入到美洲黑杨725杨rfl，在此过程巾对农杆菌介导法进行了1，护基因的活化改良实验，且对725杨的叶片和分化芽进行了潮霉素B的抗性筛选，最终对以转化的抗性植株进行分子检测。实验获得了以下结果：(1)美洲黑杨725杨叶片的最佳消毒体系为：用75％的酒精消毒时间8s，0．1％的升汞消毒3IIlin，叶片的污染率仅为5．7％，出愈率高达67．2％。(2)美洲黑杨725杨叶片的最佳诱导愈伤的培养基是：MS+6．BA0

3、．2mg／L+2，4．D1．5m{扛+蔗糖25g／L+琼脂6g／L；最佳诱导分化培养基为：MS+6．BA1．0mg／L+NAA0．3mg／L+KT0．3mg／L+蔗糖25g／L+琼脂6g／L；适宜的继代增殖培养基为：Ms+6．BA0．3mg／L+NAA0．05m班+蔗糖25g／L+琼脂6g／L；最佳生根培养基：1／2MS+NAA0．01mg／L+IBA0．7mg／L+蔗糖20g／L+琼脂6g／IJ。选择主根发达，茎健壮且达到3～5cm的组培苗进行炼苗移栽。(3)对725杨叶片分化和不定芽生根进行了潮霉素B的敏感性试验，确定叶片分化的临界浓度为2．5mI扎，生根的临界浓度为1．5

4、mg／L。(4)制备根癌农杆菌LBA4404感受态细胞，并通过液氮冻融法将pCAMBIAl300+C可lC}质粒导入到LBA4404感受态细胞中。(5)以725杨组培苗的叶片为材料，用农杆菌介导法对叶片进行遗传转化，并筛选，共获得14株潮霉素B抗性苗，最后经PCR检测得到5株为阳性苗。关键词：725杨，再生体系，根癌农杆菌，研基因，遗传转化AbstractP叩laris狃imponan_tlightind砌alrawmaterialwhosegrowⅡ1speed．Itplaysasiglli五c锄trolei11p∞teCtionandmaint血ecologicaJeIl、

5、血．011Ⅱ1ent．Somecultivatedareaofpoplarinmei11creasiI培yearbyyear，howeVer，t11ei11sectpestofpoplarhasbeenre嘶CtedthedeVelopmentofpoplaL7nlemaillfe曲Ⅱ．esof尸印”胁沈肋娩sc∥725’，which嘶tforpl觚t迦in也esoumofHu棚eriVeriIlAn“area，islli曲wate卜tole删．H0wever，也e脚砧船沈加娩J以‘725’areseriously搬kedbyiIlsertS．111e叫stalproteiIl

6、∞cf跏历缈以酊P淞括，Bt)contain仕屺specificinSecticidal劬ction．Thec巧stalproteingenesegmentofz}口cf刀淞历w枷∥e珊妇insenedt0poplarbygeneticengiIleeringcanirnprovet11einsectresistanCeofpopl碣aswdlaSreduce也een讥∞姗entalpollutioncallsedby也eexcessivecheIIlical．Thege加1plaSmresourcesofpoplararcrichiIlCllina．Poplarisanimp

7、ortantlightind谢alrawm删alwhosegro、础speedalldadaptabili锣arelligh．Itplaysasignific觚tr01einprotection砒1dmaLintaillecologicaLlenviroIlIIlentaIldi11dustrialrawmat舐2LlforestbaLseconsmlction．P叩larisalsoamodd骶ebecauseofitsbiologicaJcharacteIlis缸cs．Witll戗lei