红豆草再生体系建立及hct-c3h基因转化的研究

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：Ⅶ＼靖时间：。口／乒年乡月／2日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和

2、借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名："谰翩繇嫩时间：2口／≯年多月12日时间：2驴／垆年么月／2日万方数据本文是国家“十二五"科技支撑计划项目课题“新疆绿洲区优质牧草选育及生产利用技术集成与示范"(201IBADl7805-02)，“十二五’’农村领域国家科技计划“新疆牧草种质创新、新品种培育及草产业化研究与示范’’自治区科技支撑计划(201230116—4)课题的部分研究成果课题主持人：张博教授项目编号：2011BADl7805-02201230116·——4

3、(新疆农业大学)㈣㈣4万方数据7红豆草再生体系建立及HCT-C3H基因转化的研究摘要红豆草(OnobrychisviciaefoliaScop．)适应性强，营养丰富，因其木质素含量较高，不利于牲畜的消化与吸收。利用基因转化技术将低木质素含量的基因转入红豆草，对降低木质素含量的牧草品质育种有重要意义。本研究建立了红豆草愈伤组织再生体系，利用农杆菌介导法和基因枪法建立了遗传转化体系，将HCT-C3H基因转入红豆草。研究结果如下：(1)红豆草再生体系的建立取无菌苗子叶，叶片，下胚轴进行外植体筛选，确定下胚轴为最佳外植体；愈伤诱导培养基为MS+I．5mg‘L-12，4-D+0．4mg‘L‘16．BA

4、，暗培养20d，出愈率达95％；愈伤分化培养基为MS+0mg‘L～2，4-D+0．5mg‘L～6-BA，光照培养(光周期16h／d)，继代培养两次，55d后分化率为26．47％；生根培养基为1／2MS+1mg’L—NAA，暗培养3d后再转至光照培养(光周期16h／d)，培养20d后，生根率达33．33％。(2)农杆菌介导法遗传转化体系的建立以红豆草再生体系为实验基础，选取下胚轴愈伤组织为受体材料，采用农杆菌介导法转化受体细胞，对浸染条件采用正交试验设计。农杆菌浸染条件为Carb(羧苄青霉素)浓度500mg‘L～，菌液浓度OD6000．4，浸染时间15min，共培养时间3d；愈伤组织转至选择培

5、养基，暗培养20d后继代培养一次，再培养20d；愈伤组织转至分化培养基光照培养(光周期16h／d)，继代培养两次，待分化出的小苗长至4-5cm时转至生根培养基：小苗暗培养3d后转至光照培养(光周期16h／d)20d，得到3株再生植株。(3)基因枪法遗传转化体系的建立以红豆草再生体系为实验基础，选取下胚轴愈伤组织为受体材料，采用基因枪法转化受体细胞。设置轰击距离和轰击次数两项参数，轰击距离9cm，轰击次数1次的参数组合再生芽分化率为3．89％，高于其它组合；愈伤组织转至高渗培养基暗培养16h，转至恢复培养基暗培养7d，转至选择培养基暗培养20d，后继代培养20d；分化培养和生根培养的方法同农杆

6、菌介导法遗传转化体系；得到1株再生植株。(4)对HCT-C3H基因转化的再生植株进行PCR检测，农杆菌介导法得到的3株再生苗中检测到2株带有目的基冈，转化率为0．313％；基冈枪法得到的1株再生苗中未检测到目的基冈。关键词：红豆草；再生体系；农杆菌介导：基因枪转化；HCT-C3H基因；木质素万方数据StudyonEstablishmentofRegenerationSystemandHCT-C3H』一_rn●'●●●d●一●(／ene1ranSlormanonln3alnlolnAbstractSainfoinhasstrongadaptability,highqualityofnutrit

7、ion，butbecauseofitshi．ghlignincontent，isnotconducivetolivestock’Sdigestionandabsorption．Itisimportantsignificancetoforagequalitybreedingwhichtransferlowlignincontentgenebygenetictransformationtechnology．Int