《XY色谱分离》PPT课件

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1、第八章色谱分离ChromatographicResolution,CRChromatographicAnalysis,CA(色谱分析)纸层析实验当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。看看接下来会发生什么事情…可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。1234纸层析实验这就是纸层析法。对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。纸层析法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。1234甘氨酸半胱氨酸组氨酸缬氨酸纸层析实验纸层析小实验动

2、画演示纸层析实验动画第一节概述是一种物理分离方法，利用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中。其中一个为固定相，一个为流动相。当多组分混合物随流动相流动时，由于各组分物理化学性质的差别，而以不同的速率移动，使之分离。色谱的发展史年代发明者发明的色谱方法或重要应用1906Tswett用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念1931Kuhn,Lederer用氧化铝和碳酸钙分离a-、b-和g-胡萝卜素。使色谱法开始为人们所重视。1938TaylorUray用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。19

3、41Martin,Synge提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。1952Martin,James从理论和实践方面完善了气-液分配色谱法。1956VanDeemter提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。1957基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。1958Golay发明毛细管柱气相色谱。1965Giddings发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。1975Small发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制型电导检测的新型离子色谱法。1981Jorgenson创立了毛细

4、管电泳法。特点（1）分离效率高（2）应用范围广（3）选择性强（4）高灵敏度的在线检测（5）快速分离（6）过程自动化操作（7）适用于价格昂贵的产品第二节色谱法的分类按分离机理不同分类5大类1、吸附色谱分离2、分配色谱3、离子交换色谱4、凝胶色谱5、亲和色谱按固定相形状不同分类柱色谱纸上色谱（纸层析）薄层色谱其他分类方法1、根据流动相的物态不同：气相、液相、超临界2、根据操作压力不同：低压、中压、高压3、根据洗脱操作时展开方式：迎头法、顶替法、洗脱分析法分类总结分类原则类型特征据溶质分子与固定相相互作用的机理不同吸附色谱分配色谱离子交

5、换色谱凝胶过滤亲和色谱疏水作用色谱金属螯合色谱共价作用色谱吸附力不同各物质在两液相间的分配系数不同各物质与固定相之间的离子交换能力的不同各物质的分子大小或形状不同利用生物大分子与各种配基的生物识别能力不同各物质与固定相之间的疏水作用的强弱不同各物质与固定相上的金属离子的络合能力的不同巯基化合物的巯基与固定相表面的二硫键作用力不同分类总结分类原则类型特征据实验技术低压色谱中压色谱高压色谱电泳操作压力小于0.5MPa操作压力在0.5～5MPa之间操作压力在5～40MPa之间溶质分子在电场中的移动速度不同据固定相的形状不同柱色谱纸色谱薄

6、层色谱固定相装在玻璃、不锈钢或有机玻璃柱中固定相为以氢键与纤维素羟基结合的水固定相在玻璃平板上铺成薄层分类总结分类原则类型特征据流动相的物态不同气相色谱液相色谱超临界流体色谱流动相为气体流动相为液态流动相为液态按操作方式不同迎头法顶替法洗脱法将混合物溶液连续通过固定相，只有化学亲和力最弱的组分以纯粹状态最先流出，但其它各组分都不能达到分离。利用一种化学亲和力比各被结合组分都强的物质来洗脱，这种物质称为顶替剂。此法处理量大，且各组分分层清楚，但层与层相连，故不能将组分分离完全。将混合液尽量浓缩，使体积缩小，引入固定相的一端，然后用溶

7、剂洗脱，洗脱溶剂可以是原来溶解混合物的溶剂，也可选用另外的溶剂。第三节生物工业中的色谱分离色谱分离的规模4类：色谱分析：<10mg半制备：10~50mg制备:0.1~10g工业生产:>20g/d色谱分离根据如下几个方面选择：（1）目的产物的分子结构、物理化学特性及分子量的大小；（2）主要杂质；（3）目的产物在色谱分离过程中生理活性的稳定性。分析色谱与制备色谱及工业色谱的比较（一）应用色谱技术应用范围的不同（二）操作上的不同分析色谱：进样量愈小愈好，检测灵敏度越高越佳；制备及工业色谱：进样量越多越好。（三）色谱分离理论上的不同1、理

8、论塔板数的不同2、分配系数不同3、样品保留值与峰高不同第四节色谱分离的基本原理色谱分离图示色谱分离图示一、分配色谱利用混合物中各组分在两种互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得以分离。1、分配系数Kd=C1/C2Kd为分配系数C1，C2为固定相与流动相