松针原花青素的提取纯化及成分和功能研究

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2、111111111111111111111111Y2414655UndertheSupervisionofAssociateProfessorXULishanByMaRuiZhejiangNormalUniversityJinhua，Zhejiang，China，一一，May,2013松针原花青素的提取纯化及成分和功能研究摘要原花青素(proanthocyanidins，简称PC)是一类由黄烷醇单体及其聚合体组成的多酚类化合物。原花青素是有着特殊结构的生物类黄酮，广泛存在于各种植物中，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天

3、然抗氧化剂，能够有效防止多种疾病的发生。我国松树资源丰富，在多个省份均有广泛分布，已有研究证明松针中含有一定量原花青素，从松针中提取纯化原花青素并对其成分及功能进行研究，对充分利用松针这一松树副产物资源、进一步开发高附加值的产品具有重大意义。本研究利用浙江省松属湿地松松针资源，对湿地松松针原花青素的分离制备工艺以及其主要生物活性进行研究。研究结果总结如下：以原花青素含量较高的湿地松松针为研究对象，采用响应面法对其原花青素提取工艺进行研究。采用CentralCompositeDesign中心组合设计，对松针原花青素提取影响较大的乙

4、醇浓度、提取温度和提取时间三因子的最优化组合进行响应面试验，试验结果得出最佳工艺条件为：乙醇浓度35％、提取温度85℃、提取时间为2．5h。并在此条件下重复验证试验3次，原花青素得率为3．41％4-0．0015，与回归方程理论计算的理论提取值3．52％相近，松针原花青素粗提物的纯度为12．1％4-0．0021。采用大孔树脂对松针原花青素粗提物进行纯化，确定了11种不同树脂对松针原花青素吸附率从大到小依次为HPD700、HPD400、NKA．9、HPDl00A、HPD600、D101、XDA。l、HPDl00、DA．201．C、A

5、B．8、HPD300，选用吸附率较高的HPD700、HPD400、NKA．9进行进一步筛选。通过测定三种大孔树脂达到吸附平衡的时间、解吸率、解吸平衡时间，综合考虑选用HPD700大孔树脂为纯化松针原花青素的最佳树脂。以乙醇作为解吸剂，当浓度为30％时解吸效果最佳。经过HPD700大孔树脂纯化得到的精提物中原花青素含量达到95．21％士0．0068比未纯化前纯度提高了7．8倍。通过薄层层析法对松针原花青素精提物进行分析，经试验筛选出合适的展开剂为v(甲苯)：v(丙酮)：vC-,酸)=3：3：l，GF254硅胶板在此展开体系中原花青

6、素单体的Rf值为0．6，通过与葡萄籽原花青素标准品以及表儿茶素标准品进行对比得出松针原花青素精提物与葡萄籽原花青素所含成分相似，且里面均含有表儿茶素单体。松针原花青素精提物对DPPH·和O：一·均具有较强的清除能力，松针原花青素精提物、BHA、维生素C对DPPH·的IC50值分别为10．88p,g／mL、5．041．tg／mL、4．431．tg／mL，松针原花青素精提物和维生素C对O-．的IC50值分别为43．62gg／mL和30．671．tg／mL。松针原花青素精提物对酪氨酸酶具有较强的抑制作用，它与熊果苷标准品对酪氨酸酶的抑

7、制率分别为66．07％和85．00％。通过硅胶柱层析和凝胶柱层析对松针粗提物乙酸乙酯萃取物中的成分进行分离鉴定，由硅胶柱分离出两种物质A与B，其中A为单体物质，经1H-NMR、13C-NMR谱图的综合解析以及与文献报道数据确定A为邻苯二甲酸二异辛酯，B经过凝胶柱SephadexLH．20进行进一步纯化得到单体，经1H．NMR、13C-NMR谱图的综合解析确定B为表儿茶素，松针粉末中表儿茶素含量为100．8mg／100g。对松针粗提物中所分离出的单体表儿茶素进行抗氧化活性的测定，通过测定得到表儿茶素、BHA、维生素C对DPPH·的

8、IC50值分别为5．55gg／mL、5．04gg／mL、4．431．tg／mL。表儿茶素和维生素C对O-．的IC50值分别为IC50=54．30l,tg／mL和IC50=30．67p,g／mL。可见，松针原花青素对DPPH·的清除能力中表儿茶素起到了重要作用。关