葡萄籽原花青素的提取及原花青素清除自由基功能的探究

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1、葡萄籽原花青素的提取及原花青素清除自由基功能的探究15摘要：葡萄籽中富含原花青素，据国内外研究表明，原花青素可以清除自由基，延缓衰老，防心血管疾病等作用。本实验用正交实验法初步探索有关葡萄籽中原花青素的溶剂最佳提取方案，考察了溶剂种类，乙醇浓度，提取时间，提取温度，料液比等因素对花青素提取的影响，确定最佳提取条件是：乙醇为溶剂，提取浓度为70%，提取温度：50℃，时间为60min，料液比为1：7.以及用DPPH法测定葡萄籽原花青素抗氧化、清除自由基能力。关键词：葡萄籽原花青素自由基延缓衰老151前言：葡萄籽原花青素是由儿茶素

2、、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C或C4-C键共价相连组成的多聚体。原花青素（Proanthocyanidins），也称缩合单宁，是强氧化剂。葡萄籽提取物--OPC具有超强抗氧化能力，是维他命E的50倍，能延缓老化，预防动脉硬化，也有皮肤维他命之称，是维他命C的20倍。相关研究还研究发现，葡萄籽提取物具有清除体内过多的自由基如羟自由基(·OH)是一种氧化能力很强的自由基，可以使糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等发生氧化，(·OH)与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬有关，它能保持体内自由基和抗氧化酶之间的平衡，维持机体稳态，从

3、而预防由自由基损伤造成的各种疾病。还有抗前列腺癌、抗肝脏肿瘤的作用。本次实验初步探索有关葡萄籽中原花青素的溶剂提取方法，研究工艺提取流程，并考察了各种的影响因素对花青素提取的影响，确定最佳溶剂提取条件，为下步分离提纯提供理论依据，同时验证他其在清除自由基方面的能力，可以为花青素的临床应用提供一些理论依据。图1原花青素基本化学结构2实验目的：2.1用正交试验法对葡萄籽原花青素的提取工取进行优化研究。2.2了解并掌握分光光度计测物质含量的方法。2.3了解DPPH法测定原花青素抗氧化、清除自由基。3实验原理：3.1有机溶剂提取法：

4、15甲醇、丙酮、乙醇和乙酸乙酯是提取葡萄籽原花青素常用的有机溶剂，它们对原花青素有很好的溶解性。乙酸乙酯提取出的原花青素成分生物活性较好，但是由于极性较小，对原花青素的提取并不完全。甲醇和丙酮水溶液(50％～75％)对原花青素都有较好的提取性能，同时也多用做原花青素含量测定时的提取溶剂。原花青素分子含有多个苯环和醚键，油溶性较强，同时又有大量的羟基连接在分子骨架上，在水中具有很好的溶解性。乙醇是常用的提取溶剂，价格低廉，来源丰富。本实验用的就是乙醇。3.2正交试验：正交试验设计(Orthogonalexperimentald

5、esign)是研究多因素多水平的又一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，正交试验设计是分析因式设计的主要方法。本实验采用L9(3)，它表示需作9次实验，最多可观察4个因素，每个因素均为3水平。在完成试验收集完数据后，将要进行的是极差分析(也称方差分析）。极差分析就是在考虑A因素时，认为其它因素对结果的影响是均衡的，从而认为，A因素各水平的差异是由于A因素本身引起的。用极差法分析正交试验结果应引出以下几个结论：3.2.1在试验范围内，各列对试

6、验指标的影响从大到小的排队。某列的极差最大，表示该列的数值在试验范围内变化时，使试验指标数值的变化最大。所以各列对试验指标的影响从大到小的排队，就是各列极差D的数值从大到小的排队。3.2.2试验指标随各因素的变化趋势。3.2.3使试验指标最好的适宜的操作条件（适宜的因素水平搭配）。3.2.4对所得结论和进一步研究方向的讨论。3.3分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的，各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量

7、减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合比色原理---比尔定律。按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度（甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm）：CX=（AX/AR）CR式中CX为供试品溶液的浓度；AX为供试品溶液的吸收度；15AR为对照品溶液的浓度；CR为对照品溶液的吸收度。3.4DPPH法测定原花青素抗氧化、清除自由基的原

8、理:3.4.1二苯基苦味肼基自由基［DPPH•］是一种稳定的以氮为中心的自由基，在517nm波长处有最大吸收。［DPPH•］乙醇溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系。在［DPPH•］乙醇溶液中加入原花青素后，原花青素可以与［DPPH•］结合或发生替代，使［DPPH•］数量减少，溶液颜色变浅