拓扑替康对小鼠Lewis肺癌血管生成的抑制作用及机理的研究

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1、原创性声明本人声明:所呈交的硕士学位论文，是木人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:马4日期:aao3年少月t3口AW火‘李迹万兰学夕居丈提要肿瘤的生长和转移依赖肿瘤的新生血管生成。肿瘤的血管生成是肿瘤组织诱发的一种病理失衡，是由局部区域的刺激因子和抑制因子的平衡决定的。不同肿瘤血管生成取决于不同肿瘤微环境中血管生成因子的不同。目前，通过抑制新生血管的生成治疗肿瘤己成为

2、全世界医学界关注的热点。拓扑替康是拓扑异构酶1独特而有效的抑制剂，在多种肿瘤细胞体系和动物移植肿瘤实验中均已证实拓扑替康具有抗肿瘤活性。1998年，有学者提出拓扑替康能够减少非肿瘤的新生血管形成面积，而其对肿瘤组织血管生成影响的研究报道较少。为进一步探讨拓扑替康对肿瘤血管生成的抑制作用及机理，我们采用Lewis肺癌自发转移模型，主要研究拓扑替康对Lewis肺癌原发瘤微血管生成及对肿瘤细胞超微结构的影响。实验结果表明:拓扑替康明显抑制Lewis肺癌原发瘤的生长和转移:原发瘤组织微血管密度(microvesseldensity,MVD)明显降低，血管内皮细胞生长因子(vascularendot

3、helialgrowthfactor,VEGF)阳性率有降低的趋势;拓扑替康还能够引起肿瘤细胞及部分血管内皮细胞出现早期凋亡的形态学改变，而且上述作用具有剂量的依赖性。提示拓扑替康能够抑制Lewis肺癌微血管生成，对肿瘤细胞和血管内皮细胞有双重抑制作用。&粼又-W-/.--v居丈前言肺癌是当前世界严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，从全球范围来看，近半个世纪以来肺癌的发病率在不断的增加，尤其在工业发达国家更为突出，据国际肿瘤登记协会(IACR)报道，到80年代，英、美、法、德、荷等24个国家和地区肺癌发病率均已居恶性肿瘤首位〔”，近年来美国每年肺癌新发病例为180000，居美国肿瘤死因的首位，

4、根据我国疾病检测系统的报告，从1990年起，中国人群的肺癌死亡率以每年4.5%的速度上升，估计在未来还会上升的更快(23。肺癌易于早期转移，尽管几种化疗药物已经显示了明显的疗效，但目前的化疗方案与其对正常组织的毒性和药物耐药性明显相关。因此，人们渴望有一种对肺癌行之有效的治疗方法出现。1971年，Folkman提出肿瘤的生长和转移离不开新生血管[31，近年来，大量实验进一步证明，实体瘤在未有新生血管长入时，其大小不会超过数个mm3，此期称为血管前期，而一旦肿瘤内的血管生成则其体积可迅速增长，并使其获得转移的能力，称为血管期〔4,5,61。因此抑制肿瘤血管生成可能成为治疗肿瘤的新途径，特别是

5、抑制转移灶的微血管生成，是阻止肿瘤恶性程度进一步发展、延长患者生命的有效途径。研究表明，肿瘤血管生成是一个多因子参与的多步骤过程:①肿瘤组织释放昔:粼犬学通牙分劳fia},戈血管生成刺激因子(如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF))a②血管周围细胞外基质重塑，基质降解。③内皮细胞增殖迁移，新生血管形成。目前的研究重点是通过抑制内源性促血管生成因子(如VEGF)，利用内源性血管生成抑制因子(如血管抑素，内皮抑素)和外源性血管生成抑制因子(如TNP-470)的表达来抑制血管生成。最近报道，当肉眼观察肿瘤体积没有增大时，通过抗血管生成因子阻断血管生成，则能够达到稳

6、定疾病的目的‘13aHolmgren报道喜树碱(Camptothecin)可能属于这一类因子，它依据肿瘤的类型和包括血管结构在内的多种因素，显示了不同的抗血管生成效应t吕1。拓扑替康是一种新的水溶性的喜树碱衍生物，是从中华喜树的树干中提取的。WALL等人最早报告喜树碱有抗肿瘤作用。美籍华人科学家王卓及刘方发现DNA拓扑异构酶对DNA的复制及转录至关重要。己经明确拓扑异构酶I与超螺旋DNA结合形成所谓的“可分裂复合物”，引起短暂的由酶介导的DNA单链的断裂，在DNA复制过程中松解双螺旋结构的扭曲，当快速解螺旋后，拓扑异构酶I重新接合切口，并从DNA上分离，使解螺旋后的DNA进行转录和复制。拓

7、扑替康是DNA拓扑异构酶I独特而有效的抑制物，能够与拓扑异构酶I/DNA形成稳定的复合物，致使DNA的解螺旋和而后的复制过程被阻断。拓扑替康的这种抑制作用主要对S期细胞发挥作用。S期细胞昔亦火‘笋hIfIP屋，a}`丈由于不可逆的DNA链的断裂，复制叉被损坏，DNA合成停止，转录过程被中断，最终导致细胞死亡。拓扑替康作为新一类抗肿瘤药物，体外研究提示S期细胞内的药物浓度和暴露时间的长短可能是拓扑替康细胞毒性的重要因素〔4