白桃汤剂抑制小鼠lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究论文

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1、白桃汤剂抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究论文欧阳瑾，曹志友，王爽，雷钧涛【摘要】目的观察白桃汤剂对C57BL/6小鼠体内Lel保存备用。第VⅢ因子(F8)单克降抗体，血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗体及SP免疫组化试剂盒（均购于福州迈新生物技术开发公司）。环磷酰胺(CTX)0.2g/支（上海华联公司产品，批号:01014）。2方法2.1接种液准备将小鼠Lel-1的细胞悬液备用。2.2造模取40只小鼠，雌雄各半，体质量（18±1）g，于腋后线第6肋间胸腔接种，每只接种0.2ml，细胞计数为5×106个细胞/ml。

2、建立小鼠肿瘤动物模型。2.3分组造模2d后随机分成4组，每组10只。生理盐水组(A组)：给予生理盐水0.2ml灌胃，1次/d；白桃汤剂低剂量组(B组)：0.2ml药液灌胃（相当于40㎎/㎏），1次/d；白桃汤剂高剂量组(C组)：0.6ml药液灌胃（相当于120㎎/㎏），1次/d；环磷酰胺(CTX)组(D组),用量（60㎎/㎏）腹腔注射，1次/d，同时以生理盐水0.2ml灌胃。各组均连续给药15d。第17天处死全部小鼠进行指标检测。2.4观察项目2.4.1瘤体积、瘤重用游标卡尺测量瘤体长径和短径，计算瘤体积，瘤体积=0.5ab2(a-长径

3、,b-短径)绘制增殖曲线。肿瘤抑制率=(生理盐水组平均瘤重-给药组平均瘤重)/生理盐水组平均瘤重×100%。2.4.2肿瘤组织微血管密度(MVD)检测完整剥离肿瘤组织，10％甲醛固定，24h后石蜡包埋，切成厚4μm的切片，常规方法脱蜡脱水，PBS漂洗，兔抗鼠VⅢ因子单克隆抗体(丹麦DAKO公司)4℃孵育过夜，PBS漂洗后加二抗，室温30min，PBS漂洗后DAB显色，苏木精衬染。按试剂盒操作说明进行免疫组织化学染色，肿瘤区域内任何呈棕黄色染色的单个或多个内皮细胞、与周围肿瘤细胞及间质细胞有明确分界者计数为1个微血管，先于低倍镜(100×

4、)下确定切片中肿瘤血管最密集、染色最强的区域，在此区域内显微镜下记数20个视野肿瘤微血管数目，以平均每高倍镜(200×)视野微血管个数表示MVD［1］。2.4.3血管内皮细胞生长因子(VEGF)免疫组化染色及阳性表达结果的判定VEGF免疫组化染色采用SP法。以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知VEGF阳性的乳腺癌作为阳性对照。阳性表达结果判定采用半定量记分法，即每张组织切片染色强度：阴性0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，深棕黄色为3分。阳性细胞比例：O％为0分；≤25％为1分，26％～50％为2分；50％为3分。两项打分相加≥2分为V

5、EGF染色阳性(+)，≥4为（++），≥6（+++）［2］。2.5统计学处理采用SPSS10．0统计软件进行统计处理，MVD的组间比较采用t检验，VEGF阳性率的组间比较采用卡方检验。3结果3.1肿瘤生长曲线治疗后生理盐水组裸鼠肿瘤生长迅速，另三组肿瘤生长明显减慢，部分肿瘤停止生长，少数肿瘤缩小，但未出现肿瘤消退。治疗到第15天时移植瘤体积：A组(1260.1±476.9)mm3，B组(193.2±101.6)mm3，C组(138.0±69.5)mm3，D组(86.3±3.7)mm3。D组瘤体积明显小于白桃汤剂(C、D)治疗组(P0.0

6、5)和A组(P0.01)。到第17天时体积见表1。表1各治疗组对肿瘤的抑制作用（略）不同浓度的白桃汤剂和CTX作用于荷瘤C57BL鼠产生的影响均呈现明显的时间-效应关系。A组肿瘤平均直径明显大于各实验组。3.2抑瘤率从表1可以看出，B、C、D组的移植瘤体积、瘤重均明显小于A组。B，C组与A组比较经统计学分析有显著性差异(P0.05)，表明白桃汤剂有与环磷酸胺相似的抑瘤效果，且效果明显。3.3抗肿瘤转移作用统计各组的肺转移数目得到结果见表2，差异有统计学意义(P=0.0316)。表2各组肿瘤组织的VEGF个（略）3.4对VEGF和MVD的

7、影响白桃汤剂对肿瘤组织MVD和VEGF染色的影响B、C、D组MVD及VEGF均低于A组，有统计学意义（P0.05），见表3。说明低、高剂量的白桃汤剂均能降低肿瘤MVD及VEGF的表达，具有抑制肿瘤血管生成及转移的作用。表3各组对肿瘤MVD及VEGF的影响（略）4讨论血管生成是肿瘤浸润生长与转移的一个重要前提。实体肿瘤的生长和代谢需要持续的血管生长来支持，血管生成是肿瘤生长和代谢必备的条件，也是肿瘤细胞转移的基础［3］。大量研究证实，缺少新生血管的肿瘤往往被限制在很小的范围内，体积仅为1～2mm3［4］，血管内皮细胞黏附并向肿瘤移行是肿瘤

8、血管生成的重要步骤之一，VEGF，b-FGF，MMP等多种促血管生成物质，可以引起内皮细胞迁移，并通过向肿瘤组织内移行，实现肿瘤的血管生成［1］。因此，抑制血管生成在肿瘤治疗领域中有广阔的前景。抗肿瘤血管生