白桃汤剂抑制小鼠lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究的论文

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1、白桃汤剂抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究的论文作者：欧阳瑾，曹志友，王爽，雷钧涛【摘要】　　目的观察白桃汤剂对c57bl/6小鼠体内levd)的表达及转移发生率等指标进行检测和分析。结果白桃汤剂低、高剂量组vegf的表达率分别为54.6%、48.7%；mvd分别（27.26±3.39），（22.85±3.23）；瘤重分别为（2.66±0.46）g,(2.22±0.36)g；抑瘤率分别为35.4%,46.2%。生理盐水组vegf的表达率为79.5%，mvd为（46.18±5.21），经统计学处理有显著性差异(p<0.05)，vegf高表达率

2、与mvd的关系经直线相关分析，呈显著正相关。结论白桃汤剂可以降低移植瘤mvd与vegf的高表达率，vegf表达率与mvd呈正相关。白桃汤剂对鼠levd)及血管内皮细胞生长子(vegf)的影响，从肿瘤血管生成的角度探讨白桃汤剂的抑瘤效应及其机制，旨在为该药在临床上的进一步应用提供科学依据。　　1材料　　lel保存备用。第vⅲ因子(f8)单克降抗体，血管内皮细胞生长因子(vegf)抗体及sp免疫组化试剂盒（均购于福州迈新生物技术开发公司）。环磷酰胺(ctx)0.2g/支（上海华联公司产品，批号:01014）。　　2方法　　2.1接种液准备将小鼠leem的完全培养液中，在3

3、7℃，5%co2培养箱中培养，2～3d更换1次培养液，0.25%胰蛋白酶消化传代。细胞总数达到要求后，台盼蓝拒染法测定活细胞数＞95%，调节细胞浓度为5×106ml-1的细胞悬液备用。　　2.2造模取40只小鼠，雌雄各半，体质量（18±1）g，于腋后线第6肋间胸腔接种，每只接种0.2ml，细胞计数为5×106个细胞/ml。建立小鼠肿瘤动物模型。　　2.3分组造模2d后随机分成4组，每组10只。生理盐水组(a组)：给予生理盐水0.2ml灌胃，1次/d；白桃汤剂低剂量组(b组)：0.2ml药液灌胃（相当于40㎎/㎏），1次/d；白桃汤剂高剂量组(c组)：0.6ml药液灌胃

4、（相当于120㎎/㎏），1次/d；环磷酰胺(ctx)组(d组),用量（60㎎/㎏）腹腔注射，1次/d，同时以生理盐水0.2ml灌胃。各组均连续给药15d。第17天处死全部小鼠进行指标检测。　　2.4观察项目　　2.4.1瘤体积、瘤重用游标卡尺测量瘤体长径和短径，计算瘤体积，瘤体积=0.5ab2(a-长径,b-短径)绘制增殖曲线。肿瘤抑制率=(生理盐水组平均瘤重-给药组平均瘤重)/生理盐水组平均瘤重×100%。　　2.4.2肿瘤组织微血管密度(mvd)检测完整剥离肿瘤组织，10％甲醛固定，24h后石蜡包埋，切成厚4μm的切片，常规方法脱蜡脱水，pbs漂洗，兔抗鼠vⅲ因子

5、单克隆抗体(丹麦dako公司)4℃孵育过夜，pbs漂洗后加二抗，室温30min，pbs漂洗后dab显色，苏木精衬染。按试剂盒操作说明进行免疫组织化学染色，肿瘤区域内任何呈棕黄色染色的单个或多个内皮细胞、与周围肿瘤细胞及间质细胞有明确分界者计数为1个微血管，先于低倍镜(100×)下确定切片中肿瘤血管最密集、染色最强的区域，在此区域内显微镜下记数20个视野肿瘤微血管数目，以平均每高倍镜(200×)视野微血管个数表示mvd［1］。　　2.4.3血管内皮细胞生长因子(vegf)免疫组化染色及阳性表达结果的判定vegf免疫组化染色采用sp法。以pbs代替一抗作为阴性对照，以已知

6、vegf阳性的乳腺癌作为阳性对照。阳性表达结果判定采用半定量记分法，即每张组织切片染色强度：阴性0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，深棕黄色为3分。阳性细胞比例：o％为0分；≤25％为1分，26％～50％为2分；>50％为3分。两项打分相加≥2分为vegf染色阳性(+)，≥4为（++），≥6（+++）［2］。　　2.5统计学处理采用spss10．0统计软件进行统计处理，mvd的组间比较采用t检验，vegf阳性率的组间比较采用卡方检验。　　3结果　　3.1肿瘤生长曲线治疗后生理盐水组裸鼠肿瘤生长迅速，另三组肿瘤生长明显减慢，部分肿瘤停止生长，少数肿瘤缩小，但未出现

7、肿瘤消退。治疗到第15天时移植瘤体积：a组(1260.1±476.9)mm3，b组(193.2±101.6)mm3，c组(138.0±69.5)mm3，d组(86.3±3.7)mm3。d组瘤体积明显小于白桃汤剂(c、d)治疗组(p<0.05)和a组(p<0.01)。到第17天时体积见表1。表1各治疗组对肿瘤的抑制作用（略）　　不同浓度的白桃汤剂和ctx作用于荷瘤c57bl鼠产生的影响均呈现明显的时间-效应关系。a组肿瘤平均直径明显大于各实验组。　　3.2抑瘤率从表1可以看出，b、c、d组的移植瘤体积、瘤重均明显小于a组。b，c组与a组比较