威麦宁抑制小鼠lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果威麦宁抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长及其血管生成的实验研究作者：吴学敏金艳书娄金丽刘运芝【摘要】　　目的：探讨威麦宁对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长及其血管生成作用的影响。方法：建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型，用药后取瘤组织称重并计算抑瘤率；瘤组织切片HE染色，光镜下进行形态学观察；免疫组化法检测瘤组织血管内皮细胞CD34的表达情况并计数微血管密度(MVD)。结果：威麦宁浓度在100mg/、250mg/时，对小鼠Lewis肺癌的抑制率分别为%和%；

2、对照组癌巢间微血管丰富，用药组瘤组织及其周围微血管均减少；用药组瘤组织内MVD明显低于NS组(P【关键词】威麦宁Lewis肺癌血管生成肿瘤新生血管的形成不仅是肿瘤可持续生长的基础，也为其侵袭和转移创造了十分有利的条件。因此，抑制肿瘤微小克隆对周围血管组织的诱导，防止其最初的血管形成，对原发肿瘤的治疗以及转移灶的控制具有重要意义。金荞麦为蓼科植物天荞麦的根状茎，具有清热解毒、祛风利湿作用，是民间常用的中草药。威麦宁为金荞麦干燥根茎提取的单宁类化合物。研究发现，威麦宁具有抗肿瘤［1］及抗肿瘤转移作用［2］。本研究以Lewis肺癌的荷瘤小鼠为对象，研究威麦宁抑制肿瘤生长的作用机制。　　1材

3、料与方法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果动物与瘤株C5BL/雌性小鼠，体重(18±1)g，由中国医学科学院实验动物研究所提供，许可证号：SCXK11000006。瘤株：小鼠Lewis肺癌细胞株(LewisLungCarcinoma,LL)，中国医学科学院药物研究所提供。药品与试剂威麦宁(北京华颐中药制药厂)，环磷酰胺(CTX，中美合资山西泰盛制药有限公司)，CD34免

4、疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发公司)。威麦宁对荷瘤小鼠瘤重及抑瘤率的影响将Lewis肺癌C5BL/6荷瘤小鼠处死，取肿瘤组织并制成小鼠Lewis肺癌单细胞悬液，调整细胞浓度为1×107/mL,活细胞数大于95%。取40只C5BL/6小鼠，每只小鼠右侧腋部皮下接种。接种后按体重随机分组，每组10只。生理盐水(NS)组：每只灌胃生理盐水；威麦宁低(WML)、高(WMH)剂量组：分别按100mg/、250mg/摄入量灌胃给药，每只；环磷酰胺(CTX)组：按60mg/kg腹腔注射给药1次。给药开始于接种后第2d，给药10d后停药，次日处死小鼠，剥离肿瘤组织称重，计算抑瘤率。抑瘤率=(实验

5、组的平均瘤重/对照组的平均瘤重)×100%瘤组织HE染色课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果瘤组织用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片(厚度为4μm)、HE染色，光镜下观察。瘤组织内微血管密度(MVD)的检测各组肿瘤组织切片常规脱蜡、水化，EDTA液抗原修复后，加抗鼠CD34单克隆抗体，然后按福州迈新两步法试剂盒操作步骤进行：加试剂A和B，加新配制的底物DAB溶液。苏木

6、素复染，盐酸酒精分化，梯度酒精脱水干燥，中性树胶封片。实验设阳性与阴性对照。结果判定标准：CD34阳性内皮细胞被染成棕黄色。由内皮细胞形成的条状、隙状等孤立或簇状结构并有管腔，且管腔小于8个红细胞大小者为一条血管；相互分离的内皮细胞但无明显管腔亦按1条血管计数。血管腔大于8个红细胞或管壁可见平滑肌者不计入内［3］。微血管密度计数方法：先在低倍镜下(100倍)确定3个CD34阳性着色最密集的区域，然后在高倍视野(400倍)下计数微血管，取3个视野的均值作为微血管密度(MVD)。肿瘤内硬化区域和肿瘤细胞稀少区域内的微血管不进行计数。统计分析采用SPSS软件进行方差分析。　2结果.1威麦宁

7、对Lewis肺癌小鼠瘤重及抑瘤率的影响课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果WMH、CHX两组小鼠瘤重减轻，与对照组相比显著差异(P.2威麦宁对小鼠Lewis肺癌瘤组织形态学变化的影响经HE染色后镜下观察，可见瘤组织内肿瘤细胞密集排列，瘤细胞大小不同，