tnf--α诱导pc12细胞凋亡及对bcl--2和baxmrna表达的影响

《tnf--α诱导pc12细胞凋亡及对bcl--2和baxmrna表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国医科大学（辽宁）硕士学位论文TNF--α诱导PC12细胞凋亡及对bcl--2和baxmRNA表达的影响姓名：肖莹申请学位级别：硕士专业：临床医学;神经病学指导教师：曹云鹏2012-09·中文论著摘要·TNF．仅诱导PCI2细胞凋亡及对bcl-2和baxmRNA表达的影响目的临床研究和动物实验表明，脑内神经炎症与多种慢性神经退行性疾病如帕金森病(PD)、阿尔茨海默病(AD)和多发性硬化(MS)等的发生、发展密切相关。抑制神经炎症反应能减弱受损脑区的神经元病变。肿瘤坏死因子。【(TNF．0【)在各种炎症和免疫反应中由多种细胞分泌的一类多向性细胞因子。其在中枢神经系统急慢性炎性或变性病

2、如缺血性脑血管病，PD，老年痴呆，肌萎缩侧索硬化及多发性硬化中表达升高。TNF．0【合成过量会导致神经细胞出现病理性凋亡。以往认为TNF．13,诱导凋亡的通路只有通过死亡受体通路，目前许多研究证明，凋亡通路也会通过线粒体途径。在调控线粒体介导的细胞凋亡中，B细胞淋巴瘤／白血病-2(Bcl．2)家族蛋白及它们的相互作用发挥了重要的作用。bcl一2基因对线粒体膜的完整性具有保护作用，可能是此基因抗凋亡作用的主要机制。bcl．2基因表达增高，抑制细胞凋亡。凋亡基因bax则是Bcl．2家族的另一个重要成员，不但可以促进细胞凋亡，而且是凋亡途径关键环节。Bcl．2家族蛋白中促凋亡与促生存蛋白之

3、间的相互作用控制细胞色素C等物质从线粒体释放，对线粒体凋亡路径发挥了十分重要的调控作用。PCI2细胞作为神经元细胞模型，广泛用于神经生理、病理及药理方面研究。本实验选用PCI2作为研究对象，探讨Bcl．2家族基因是否参与TNF．0【对PCI2细胞的毒性作用。利用不同浓度TNF—a分别作用于PCI2细胞，并检测同一浓度不同时间点PCI2细胞的凋亡相关基因bcl．2mRNA和baxmRNA表达情况，希望能够为研究和治疗神经变性疾病以及TNF．仅相关疾病的治疗新策略提供有力的理论基础。材料与方法一、PCI2细胞培养PCI2细胞培养于RPMI1640培养基，其中含5％胎牛血清、10％马血清，

4、接种于25cm2塑料培养瓶中，置于37"C、5％C02饱和湿度条件下培养箱内进行常规培养。二、生化指标的测定1、MTT法检测不同浓度TNF．值作用下PCI2细胞生存率。2、AnnexinV／PI双染法经流式细胞仪检测不同浓度TNF．a作用下PCI2细胞凋亡率。3、AnnexinV／PI双染法经流式细胞仪检测30ng／mlTNF-a作用下不同时间点PCI2细胞凋亡率。4、30ng／mlTNF．0【作用下不同时间点PCI2细胞电镜形态学观察。5、RealtimePCR法检测不同时间点PCI2细胞bcl．2mRNA、baxmRNA表达。三、统计学处理所有数据采用SPSSl8．0进行分析，多

5、组间计量资料比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，P<0．05为差异有统计学意义。结果1、不同浓度TNF．0【对PCI2细胞的影响结果细胞生存率随着TNF．0【浓度增加而降低，并呈浓度．效应关系。其中浓度为30ng／ml时细胞生存率为50．65％，细胞凋亡率为41．64％。2、30ng／mlTNF．0【作用下各时间点PCI2细胞凋亡结果采用30ng／mlTNF．0【处理PCI2细胞，Oh、6h、12h、24h后，AnnexinV／PI双染法经流式细胞仪检测各个时间点PCI2细胞凋亡情况，结果发现，30ng／mlTNF．Q作用于PCI2细胞24h时细胞凋亡率最高(P

6、。3、30ng／mlTNF。a作用下oh和24h时间点PCI2细胞电镜观察结果未加药组PCI2细胞呈圆形，微绒毛丰富，胞浆内见粗面内质网，线粒体及糖2原颗粒，核巨大且切迹明显；24h组可见细胞核碎裂及细胞质空泡化，细胞膜光滑无突起，染色质浓集。4、30ng／mlTNF-ot作用下各时间点PCI2细p咆bel．2和baxmRNA表达结果采用realtimePCR检测bcl．2mRNA和baxmRNA表达，结果显示，与oh组相比较，baxmRNA明显上调(P

7、度．效应关系。2、在30ng／mlTNF．Q浓度作用下，0--一24h内24h时间点PCI2细胞凋亡率最高(P