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《牛孤雌胚体外培养和体细胞核移植的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、摘要摘要本试验在体外成熟培养液中添加EGF，研究其对核及质成熟的作用，并通过孤雌激活来检验EGF对牛卵母细胞胞质的成熟。在培养液中添加各种血清或牛血清白蛋白，这是适宜的也是必要的，但何时添加血清国内未见报道。影响核移植胚胎发育潜力的主要因素之一是供体核和受体细胞质细胞周期的一致性。血清饥饿是使细胞同步化于GO/G1期常用的方法:Roscovitine是Cdk2抑制剂，可以抑制Cdk2激酶活性，使细胞同步化于G1期，将细胞从Ros中移出后，细胞又可以进入S期。本研究还探讨血清饥饿、Roscovitine(Ros)和非饥饿等方法，比较其
2、对核移植胚发育的影响。同时，用成纤维细胞和颗粒细胞作供体细胞对比其核移植胚的发育。其结果如下:1.在牛成熟培养液中添加表皮生长因子(EGF)中分别添加0,10,30,50ng/mLEGF,24h检查成熟率，将成熟的卵母细胞置于5pmol/L离子霉素(lonomycin)激活5min,然后在含有6-DMAP和细胞松弛素B(CB)的培养液中培养4h，最后移入CR1培养液中培养，7-8d检查囊胚率。结果表明:添加30ng/mL的EGF提高牛卵母细胞的成熟，同时结果显示添加EGF能够促进牛孤雌囊胚的发育率，说明EGF即可提高牛卵母细胞核成熟
3、，也可促进胞质的成熟。2.体外成熟的牛卵母细胞经离子霉素孤雌激活后第0,2,4,6d添加1096(v/v)胎牛血清(FBS),7-8d检查囊胚率。结果表明，添加FBS的时间以4d开始效果较好，在胚胎发育的Od,2d开始添加不利于孤雌胚胎的发育。3.通过胞质内注射，比较经血清饥饿、非饥饿和Roscivitine(Ros)处理牛成纤微细胞、颗粒细胞。研究发现，(1)非饥饿组、Ros组的牛成纤微细胞重组胚囊胚发育率与显著高于血清饥饿组重组胚囊胚发育率(p<0.05),Ros与非饥饿组之间无显著差异(p>0.05);(2)而用同样的方法处理
4、牛颗粒细胞，Ros组与血清饥饿组重组胚囊胚发育率之间差异不显著(p>0.05)，非饥饿组显著高于Ros和血清饥饿组(p<0.05).4两种类型细胞经血清饥饿、非饥饿处理后差异不显著(p>0.05)，但经ROS诱导后，牛颗粒细胞重组胚囊胚发育率显著高于牛成纤微细胞(p<0.05)0结论:EGF可促进牛卵母细胞成熟;用孤雌激活的方法可检验胞质成熟;用非饥饿、Ros处理牛成纤维细胞重组胚的发育率较高，非饥饿的牛颗粒细胞发育率较高;牛颗粒细胞更有利于重新程序化。关键词:牛:孤雌胚胎;培养:体细胞:核移植牛孤雌胚体外培养和体细胞核移植的研究A
5、bstractTheefectofEGF(epithelialgrowthfactor)onthematurationofoocytenuclearandcytoplasmisstudiedbyaddingEGFinculturemediainvitro.Inaddition,itisalsoexaminedbyparthenogeneticactivation.ItisnecessarytoaddvariousserumsorBSA(bovineserumalbum)inculturemedia,butthesewhentobea
6、ddedhasn'treportedinourcoun盯Oneofthemainfactors,whichimpactembryodevelopmentofnucleartransfer,isthesynchronizationofcellcycle.Usually,thewayofserumstarvationiscommoninembryonucleartransferring.Inthisway,cellcycleissynchronizedinGO/G1period.Ros,theinhibitorofcdk2,canmak
7、ecellsbeinGIperiodbyinhibitingtheactivationofcdk2kinase.CellsarebackintoSperiodagainiftheyaretakenfromRosmedia.Inthispaper,thedevelopmentofnucleartransferembryoisstudiedwhichistreatedbyserumstarvation,Rosmedia,non-starvationrespectively.Meanwhile,thediferenceofreconstr
8、uctedembryodevelopmentbetweenfibroblastsandgranularcellsasdonorcellisalsostudied.Theresultisasfollows.1.Thematuration
