黑熊家猫种间体细胞核移植研究

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1、第四军医大学硕士学位论文黑熊-家猫种间体细胞核移植研究姓名：刘志春申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：张生勇;李六金2003.6.1猿错憾毒曛秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方9}，论文中不雹含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论姗者签名：刘盘套日期：毒堕、垃保护知识产权

2、声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文I作的知识产权单位屑第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文I作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查同和借阋；学校司以公布论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。论文作者婚训j垒一导师签名私噬雩日期：趔生竖。》‘箜!至垦盔兰塑主兰堡垒圭缩写FBSNCSIVFIVMCCBHCGFSHPVP6．DMAPCHXFLCDAGDMSoESPGCsFGFCoCNEBDMPFPCCPMSGPbl英文缩略词对照表英文

3、全称fetalbovineserumnew-bomcattleseruminvitro．fertilizedinvitro—maturedcytochalasinBhumanchorionicgonadotropinfolliclestimulatinghormonepolyvinylpyrrolidone6一N．N'-dimethylaminopurincycloheximideflowcytometry1，2-diacyl—glyceroldimethylsulfoxideembryonicstemcellprimordialgermcellfibroblastgro

4、wthfactorscumulus—oocytecomplexesnuclearenvelopbreakdownmaturationpromotionfactorprematurechromosomecondensmionpregnantmareserumgonadotrophinfirstpolarbody中文全称胎牛血清新生牛血清体外受精体外成熟细胞松弛素B人绒毛膜促性腺激素促卵泡素聚乙烯吡咯烷酮6一N，N’一二甲氨基嘌呤放线菌酮流式细胞仪1，2-甘油二酯二甲基亚砜胚胎干细胞原始生殖细胞成纤维细胞生长因子卵丘一卵母细胞复合体核膜破裂促成熟因子早熟染色体浓缩孕马血清促性

5、腺激素第一极体黑熊一家猫种间体细胞核移植研究硕士研究生：刘志春导师：张生勇教授，李六金教授(第四军医大学化学教研室实验动物中心710032)摘要本研究运用体细胞核移植的原理和技术，以六月龄雌性黑熊的成纤维细胞为供核体，去核未受精家猫成熟卵母细胞为受体，构建种间核移植重组胚胎，研究种间体细胞核移植胚胎的构建方法和重组胚胎的体内外发育潜能及其影响因素。并重点讨论影响种间核移植重组胚胎发育的主要因素。主要内容和结果如下：(--)黑熊成纤维细胞的分离培养和纯化^—』从黑熊耳缘皮肤和颈部皮肤取材，采用组织块培养法分离培养黑熊皮肤成纤维细胞，在DMEM和RPMll640两种培养基中分

6、别添加10％的胎牛血清，均可满足黑熊皮肤成纤维细胞的体外生长和传代。通过单细胞集落显微法纯化细胞，操作简单而且(二)黑熊成纤维细胞的同步化处理和流式细胞仪分析．～L分离培养黑熊皮肤成纤维细胞，连传3代，分别经血清饥饿2d、3d、4d、5d、6d处理和10ug／mlNocodazole处理24h。流式细胞仪分析结果表明，血清饥饿处理能较好地使黑熊成纤维细胞同步于Go和G1期，其中饥饿3d时，Go+G1期的细胞所占百分率最高，达到(85．05±7．0)％；而Nocodazole处理笙里至墨盔芏堡主兰竺笙圭则使细胞较大程度同步于G2和M期，达到(46．30±4．20)％。两种同

7、步化处理与未处理组细胞周期有显著差异(P<0．05)。y(三)超数排卵获取家猫成熟卵母细胞的研究。／用促卵泡素(FSH)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)．．．—．——．!L建立家猫的超数排卵方法。结果表明，FSH+HCG组与FsH+30％PvP+HcG组收集成熟卵母细胞数(FSH100单位／只剂量时)分别为18．8±3．71枚、19．1±2．77枚：可用卵数分别为12．4±2．88枚、12．7+2．41枚，比非激素处理的对照组高出3倍以上，与对照组有显著差异(P