牛孤雌胚胎凋亡与氧化损伤的研究

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1、分类号：笾!i：Z：姐!玉111，塾!!：{uDc：§21：!§；鲤§：Z!密级；公珏丕洼蜜级一学枝代码：10712研究生学号：SY20040995⑧函北农林科杖大学2007届攻读硕士学位研究生学位(毕业)论文牛孤雌胚胎凋亡与氧化损伤的研究学科专业研究方向研究生指导教师完成时间中国陕西杨凌牛孤雌胚胎凋亡与氧化损伤的研究摘要卵母细胞的孤雌激活对于一系列与卵母细胞及胚胎相关的技术如胞质内精子注射、核移植等非常重要，然而孤雌激活受激活方法、胚胎培养液、培养气相环境等各种因素的制约，卵裂率、囊胚率均较体外受精(IVF)胚胎差，本文就牛孤雌胚胎凋亡与氧化损伤方

2、面展开研究，旨在提高孤雌激活水平，为克隆技术提供技术基础。1．分别用离子霉素(Ion)+6-DMAP与Ion+放线菌酮(CHX)激活牛卵母细胞，用TUNEL法检测孤雌胚胎凋亡发生的起始、频率，以及凋亡细胞的形态学变化。结果显示，虽然Ion+6--DMAP(ID)组的卵裂率较Ion+CHX(Ⅸ)组低，但囊胚率显著高于Ⅸ组。第5d首先在Ⅸ组检测到TUNEL阳性核，m组凋亡比Ⅸ晚ld发生。ID组的凋亡率从第6d开始到第8d由8％增加到11％，而Ⅸ组则由13％增加到19％，可见二者增长幅度很相近。Ⅸ组平均囊胚细胞数比m组显著减少，但凋亡率却比D组高。结果表明

3、牛孤雌胚胎存在凋亡，但采用Ion联合6-DMAP激活牛卵母细胞，胚胎发育情况相对较好一些。，2．在牛卵母细胞成熟液和胚胎培养液中添加p．巯基乙醇(B．ME)，研究pME对牛卵母细胞核成熟和孤雌胚胎发育的影响。牛卵母细胞体外成熟液中分别添加0．05，0．1，O．15mmol／L争M匠，检查核成熟率；激活的卵母细胞分别培养在含O．05，O．1，0．15mmol／Lp．眦的SOF中，或在1．细胞期、8．16细胞期、桑葚胚期分别添加0．1mmol／L13-ME，第168～192h检查囊胚发育率。结果表明，肛ME对牛卵母细胞核成熟无显著影响(尸>0．05)；0

4、．05，0．11111110l／L13-ME可显著提高牛孤雌胚胎卵裂率及囊胚发育水平，而以0．1mmol／L13．ME添加组效果最佳；牛孤雌胚胎发育到8～16细胞期前添加0．1mmol／Lp-ME囊胚发育水平显著提高(P(O．05)，而1．细胞期组与8～16细胞期组囊胚率、囊胚细胞数差异显著(P

5、esis哔)oftheoocyteisessentialtoanumberofoocyte-orembryo-relatedtechnologiessuchasintracytoplasmicsperminjectionandcloningbynuclear位msfor．ThecleavedrateforthePAembryoswaslower,comparedwithin-vitrofertilized0VF)embryos，andSOwastherateofdevelopmenttotheblastocytestage，becauseofacti

6、vationmethod，in-vitroculturemedium,andoxygenconcentmtiomThepresentstudyinvestigatedapoptosisandoxidativedamageofbovinePAembryos，aimingtoimproveperthenogeneticactivationasatechnicalbaseofcloning．1．BovineoocyteswereparthenogeneticactivatedbyIonomycin+6-DMAP(ID)andIonomycin+Cycloh

7、eximide(田respevtively,andtheonsetandfrequencyofapoptosisinPAembryosandthemorphologicalchangesthatconformtothegeneralcriteriaofapoptoticcelldeathbyusingaterminaldcoxynucleatidylWansfemse-mediateddeoxyuridine5-(riphosphatenick-endlabcling(TUNEL)assayWCI"einvestigated．IXgrouphadah

8、ighercleavagerate(86％vs79％)，andalowerdevelopmentrateto