基础研究E1A阻断ras诱导人成纤维细胞衰老机制的研究

《基础研究E1A阻断ras诱导人成纤维细胞衰老机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、·1392·南方医科大学学报（JSouthMedUniv）2011;31(8)·基础研究·E1A阻断ras诱导人成纤维细胞衰老机制的研究12李亦蕾，余乐12南方医科大学南方医院药学部，药学院，广东广州510515摘要：目的通过研究E1A氨基端细胞生长调节蛋白结合活性对其阻断ras诱导的细胞衰老的影响，以明确在人类成纤维细胞E1A阻断ras诱导的细胞衰老的机制。方法采用原代培养的人类成纤维细胞，通过灭活或干扰与E1A氨基端相关的细胞生长调节蛋白，包括Rb家族蛋白、p300/CBP、p400，利用细胞生长曲线确定这些蛋白结合活性对于E1A阻断ras诱导的细胞衰老的

2、作用。结果单纯灭活Rb家族蛋白不能阻断ras诱导的细胞衰老，而同时灭活Rb和p300/CBP即可阻断ras诱导的细胞衰老。结论Rb和p300/CBP的结合活性均是E1A阻断ras诱导的人成纤维细胞细胞衰老所必需的。关键词：E1A；ras；癌基因；人成纤维细胞中图分类号：R96文献标志码：A文章编号：1673-4254（2011）08-1392-04MechanismofE1A-mediatedescapefromras-inducedsenescenceinhumanfibraoblastsLIYi-lei1,YULe21DepartmentofPharmac

3、y,NanfangHospital,2SchoolofPharmaceuticalSciences,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,ChinaAbstract:ObjectiveTostudytheeffectofbindingactivitiesoftheNH2terminusofE1Atotheproteinsregulatingcellgrowthonras-inducedcellsenescenceandexplorethemechanismofE1A-mediatedescapefromras-in

4、ducedsenescencebyE1Ainhumanfibroblast.MethodsInprimaryhumanfibroblasts,theproteinsregulatingcellgrowthinassociationwithE1ANH2terminus,includingtheRbfamilyproteins,p300/CBP,andp400,wereinactivatedorinterfered.Theeffectofalterationsinthebindingactivitiesoftheseproteinsoncellsenescence

5、bypassmediatedbyE1Awasevaluatedbycellgrowthcurve.ResultsInactivationofRbfamilyproteinsalonewasnotsufficienttorescueras-inducedcellsenescence,whereasinactivationofboththeRbproteinsandp300/CBPblockedras-inducedsenescenceofhumanfibroblasts.ConclusionRbandp300/CBPbindingactivitiesarebot

6、hrequiredforE1Atobypassras-inducedsenescenceinhumanfibroblasts.Keywords:E1A;ras;oncogene;humanfibroblasts［6］尽管癌基因ras的异常激活是肿瘤形成的关键一ras诱导的细胞衰老。既往研究表明，E1A的氨基端可［1-2］步。但单纯的ras基因活化在多种类型的细胞可诱导与Rb家族蛋白、p400、p300/CBP这些细胞生长调节蛋［3-4］［7］一种相对稳定的生长停滞状态，称为细胞衰老。目前白结合。因此，本研究以人类成纤维细胞进一步研究认为ras诱导的细胞衰老是一

7、种正常细胞对肿瘤形成的了这些细胞生长调节蛋白在E1A1-143阻断ras诱导的防御机制。因此癌基因ras造成的肿瘤转化必须有其它细胞衰老中的作用。的基因变化来协同作用，以绕过或阻断这种细胞衰老反［5］应。在人类细胞，如何绕过或阻断ras诱导的细胞衰老1材料与方法知之甚少。E1A是一种人类腺病毒5型的癌基因，可直1.1材料接作用于多种细胞蛋白，调节细胞生长。E1A的氨基端细胞培养基DMEM、0.25%胰蛋白酶（购自美国可通过调节细胞生长调节蛋白来产生肿瘤转化活性，而Gibco）。胎牛血清（购自杭州四季青生物工程材料研究其羧基端可负性调节氨基端的癌基因活性，使得细

8、胞容所）。β-actin（购自美国Si