adma对人皮肤成纤维细胞衰老的作用及机制研究

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1、分类号VDC硕士学位论文密级ADm对人皮肤成纤维细胞衰老的作用及机制研究StudyontheroleandmechanismofADMAinceUularSeneSCenCe0InUmanSKlnIlDr0DIaStS●●■●一'●』作者姓名：李文芝学科专业：皮肤病与性病学学院(系、所)：湘雅医院指导老师：谢红付教授论文答辩日期型兰：!』2答辩委员会主席一中南大学二O一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或

2、证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：!娄№学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。雄耀日期：丝旦年舅啦日硕士学位论文一．±壅塑薹．---__-—I----_-_-_—_--—●-___-●-_-_●-—-__-_-_-_--_-—

3、--—●●————————————————一摘要目的：研究非对称性二甲基精氨酸(asymmetricaldimethyl鹕inine，ADMA、)对人皮肤成纤维细胞(H啪觚skin助roblasts，HSF)衰老的影响及其可能机制。方法：1．用高效液相色谱(印)LC)法测定自然衰老和光老化皮肤组织和成纤维细胞中ADMA的浓度。2．原代培养人皮肤成纤维细胞，MTT比色法评价ADMA对HSF增殖的影响，确定最佳药物处理浓度。3．不同浓度ADMA(10，30，50州)作用于HSF，48小时后，用p一半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老相关p．半乳糖苷酶活性，活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(Reactive

4、OxygenSpecies，ROS)浓度，免疫印迹法(westem-bolt)检测磷酸化p38MAPK，衰老相关蛋白P16、M卜佃．1的改变。4．预先加入P38抑制剂SB203580(10州)或抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸Q渔C)(10山)1小时后，再加入ADMA(50脚)处理，上述同样的方法检测以上指标。结果：1．年老组皮肤组织和成纤维细胞中ADMA含量均明显高于儿童组(P

5、能力也相应增强，IC50=51．47士1．013肛M。3．不同浓度ADMA(10，30，50“M)处理HSF48小时后，细胞密度减少、细胞变大变圆，p．半乳糖苷酶染色率、衰老相关蛋白P16均随ADMA浓度的增加而增加(P

6、P16蛋白、ROS浓度、磷酸化p38MAPK及MMP．1蛋白的升高。结论：1．自然衰老和光老化皮肤组织及成纤维细胞中ADMA的含量显著上升，ADMA在皮肤衰老过程中起重要作用；2．ADMA能通过促进ROS的产生、激活p38MAPK磷酸化、从而促进MMPl的生成而诱导人皮肤成纤维细胞的衰老。关键词ADMA，皮肤衰老，ROS，p38MAPK，MMP一1硕士学位论文英文摘要ABSTRACTobjectiVeStudyontheroleandmechanismof舢)MAincellularsenescenceofhlInanskinfibroblaSts．Methods1．Tbmeasure恤eco

7、ncen订ationofADMA盘omcutaneousceUa11dtissueofn孤舰lagillgandphotoagingus洫g}玎，LC．2·Inordertoensurethebestdrugconcentration，weuseMTTassaytoeValuatethee艉ctof删toproliferationofHsF(面m叫H啪anskillfibroblasts)．3．W