中国明对虾两种免疫相关蛋白的表达与功能研究

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1、ADissertationSubmittedtoMay，2012原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任人由本人承担。论文作者签名：概翱a日期：∥／二’』．·玎学位论文版权使用授权书本人完全了解中国科学院海洋研究所有关保留、使用学位论文的规定，同意海洋研究所保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。

2、本人授权中国科学院海洋研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。(保密论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签字：孝专客Jj签字日期：沙，z·j．-玎导师签字：翻遣岳签字日期：夕，≯·r'万致谢致谢从2006年秋至12011年夏，5年的硕博联读似乎转瞬而过，但这5年生活值得我用一生来回味。因为它代表着艰辛但同样洋溢着快乐，它是由无数关爱、教诲和帮助凝结的宝贵结晶。当最终行进到这段人生旅程的尾声，我内心里怀着满满的感激和谢意。我要感谢我的导师相建海研究员。在这5年间，他给予了

3、我学习和生活上无微不至的关心。相建海研究员以其诲人不倦的学术精神、严谨的治学态度和亲和大度的人格魅力深深影响了我，引领我一步步走入学术的殿堂。我每一份收获与回报都有着导师的指导和关怀。我要感谢王兵老师和李富花老师。从我刚进入实验室指导我的实验技术操作到开展研究工作，从探讨实验遇到中的各种问题到规划实验方案到最终修改论文，从作报告前的准备到日常和老师同学们的相处，王兵老师和李富花老师都不吝引导和帮助。我要感谢刘保忠老师、张晓军老师和柳呈璋老师给予的许多建议支持以及生活上的关心!我还要感谢于奎杰老师和张成松师兄在对虾的养殖方面给予的帮助。感谢张岩老师

4、和范建生阿姨在我工作和生活中给予的关心和帮助。我要感谢各位同门师兄弟姐妹，在5年的学习时光中，我们如亲人般相处，因为有着你们的陪伴，我才能够心胸开朗的度过这段磨砺的岁月。感谢郇聘师兄、栾伟师兄、周茜师姐、张晓明师姐和王晓梅师姐在我初入实验时的提点和帮助；感谢黄冰心师姐、蒋吴师兄和张晋康在蛋白质谱工作中给予的帮助；感谢谢玉素师姐、罗展师姐和岳欣在我进行蛋白纯化、Westernblot和免疫组化实验时的帮助；感谢杨昌健师兄、闰慧师姐、Priya和孙玉苗，在我实验失败、进展缓慢和心情郁闷的时候给了我诸多安慰和建议；感谢李师豪，特别在比利时的那段留学时光

5、里的关心和帮助，让我尽快的适应了那里的生活；感谢王霞、王东东、赵翠和宋光年，你们对生活的热情深深的感染了我；感谢王丽艳、栗治国、段虎和王超在实验过程中对我的帮助；感谢同组温荣、于洋、张秀英、游雅楠、卢霞、陈桢、史英力和姚学良等同学在工作和生活上的帮助伴我度过了美好时光，谢谢你们!感谢室友姜珊和高燕在生活中的关照，我们如同亲人般生活了4年时光!桂朗中国蜩对虾曲种免疫相关蛋白的表达与功能分析博士学位论文而所有其他帮助和关心我的同学，在此不能一一提名，在此我向他们表示真诚的感谢!我要深深的感谢我的父母!你们用博大宽容的爱包容了我，慷慨的送予了一片属于我

6、自己的天空，让我可以尽情生长。你们对人生的自强不息、对学术的孜孜钻研和人格中自信乐观是我一直以来的榜样和明灯。你们永远是我依靠和支持，我爱你们!最后，我要感谢我的爱人。是你让我结束了感情的漂泊，有了温暖的后盾。你是我的开心果，是我放松和休憩的港湾。感谢你对我生活上的呵护和关心，让我可以安心专注于学习中。硕博连读5年的历练之路，虽然痛，但因为我有各种支持和陪伴，才能够快乐得走着。博士论文终于完成了，新的征程才即将开始，但我不会迷失和孤单，因为我们一直同在!¨摘要本论文以中国明对虾为研究对象，利用体外重组表达技术，对中国明对虾免疫相关膜蛋白基因Tet

7、mspanin-3gene(FcTetraspanin一3)和抗菌肽FcCar进行了重组表达，并对重组蛋白的功能进行了研究。FcTetraspanin-3是组成型表达于中国明对虾中各组织中四跨膜蛋白，在被对虾白斑综合征病毒Whitespotsyndromevirus(wssv)感染后明显上调。我们通过FcTetraspanin．3基因的cDNA序列，设计引物克隆获得FcTetmspanin．3的膜外大环区(1argeextracellularloop，LEL)序列。在大肠杆菌中进行LEL的体外重组表达与分离，并利用LEL重组蛋白制备抗兔多克隆抗体

8、anti—LEL。分别利用RealtimePCR和Westernblot检测各组织中FcTetraspanin-3表达水平。结果表明：F