中国明对虾幼体对卵黄蛋白的利用研究

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1、河北大学硕士学位论文中国明对虾幼体对卵黄蛋白的利用研究姓名：白涛申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：谢松20050601摘要本实验首次尝试用选择性沉淀法提纯中国明对虾的卵黄蛋白，并建立了EDTA—MgCl2提纯卵黄蛋白的方法。利用层析法(SephadexG—150，DEAE～Cellulose一52‘)大量提纯了中国明对虾卵巢中的卵黄蛋白，采用常规免疫方法，以纯化的卵黄蛋白作为抗原来免疫家兔，制备了卵黄蛋白的抗血清。并利用此抗血清进行对虾雌性蛋白的免疫学研究，通过免疫扩散和免疫印迹反应检测了抗血清的特异性。利用卵黄

2、蛋白抗血清的高特异性，建立了阀接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)测定中国明对虾卵黄蛋白的方法。并确立了测定参数：抗血清与包被抗原的最佳工作浓度分别为1：10000和．125ng／mL卵黄蛋白；最适检测范围为10～500ng／mL；批内变异系数为5，O％，批闯变异系数为6．2％。采用ELISA方法测定了中国明对虾卵及无节幼体时期卵黄蛋白含量的变化，卵黄蛋白台量～直呈减少的趋势，N3～。至N5～6期和N5～6至zl期两个时期卵黄蛋白的消耗量最大，分别为1322ng／mL和1213ng／mL，占卵中郛黄蛋白总量的38，9％和3

3、5．7％，Z1期以后体内基本不含卵黄蛋白。本文测定了中国明对虾无节幼体时期几种消化酶活力。试验结果表明，在中国对虾幼体发育过程中，四种消化酶活力表现出三种变化模式。在幼体发育初期，蛋白酶就具有活力，在N3～4、N5～6时期各个酶活力均有较大幅度的增长，这与中肠腺的分化程度有关。卯黄蛋白的分解吸收与消化酶的活性密切相关。关键词：中国明对虾；卵黄蛋白；免疫学；营养；ELISAAbstract．StudiesontheUtilityofVitellininLarvalofthePrawn，Fenneropenaeuschinen

4、sisThisexperimentestablishedamethodfirstly，whichvitellinwasprecipitatedbyEDTA-M【gCl2．Thevitellinwasisolatedandpurifiedwithchromatography(SephadexG，150，DEAE—Cellulose-52)．Accordingtoaroutinemethod，aspecificantiserumagainstpurifiedvitellinwasraisedfromrabbit．Immunol

5、ogicalcharacteristicsofthefemalespecificproteinwerestudiedwiththeantiserum．BythemeansofimmunoprecipitationreactionandWestern—blotting，itwasprovedthattheantiserumwasspecific．Anindirectcompetitiveenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)fordetectingVitellincontentofFen

6、neropenaeuschinem'iswasestablished，Theoptimumconcentrationofantiserumandantigencoatingwere1：10000an．d125ng／mLVitellin，respectively．Thelineardetectionrangedfroml0ng／mLto500ng／mL，withmeanintra—andinter-assaycoefficientsofvariationwere5．O％and6．2％．respectively．Bytheme

7、ansofELISAtodetectthechangeofVitellincontentintheeggsandlarvaofdifferentstageofEchinesis，thecontentofVitellindecreasedalongwiththedevelopmentoflarvalprawn．ViteUinwasdigestedveryquicklyfromN3～4toNs～6andfromN5～6toZl，thedecreaseofVitellinwere1322nffmLand1213n#mL，itoc

8、cupiedgrossofVitellincontentofeggs38．9％and35．7％，respectively．AfterthestageofZl，thecontentofVitellinwasnotdetected．Activitiesofseveraldigestiveenzymesfro