对虾吞噬调控相关的mir1功能以与sirna结合蛋白的研究

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1、浙江大学硕士论文摘要miRNAs是一类长度约20．24m内源的非编码的单链小RNAs，从病毒到高等动植物普遍存在，通过转录后水平调控基因的表达，在生物系统发育、细胞分化、物质代谢、肿瘤发生等多种生命过程中发挥着不可或缺的作用。为了探究吞噬相关的miRNAs，本研究设计专一性抑制微丝聚合的细胞松弛素B处理对虾，影响细胞的吞噬活性，在此基础上进行高通量miRNAs测序。比较对照组和试验组的miRNAs差异序列，筛选到2l条可能参与吞噬调控的miRNAs，为miRNAs调控吞噬的机制研究提供基础数据，有助于我们更

2、深入的了解对虾的吞噬机理。基于吞噬调控相关的miRNAs高通量测序数据，选取进化上具有高度保守性、表达量也相对较高的miR-1，在对虾和小鼠细胞Raw264．7中对其调控吞噬的机制进行深入的试验探究。研究发现，miR-1通过调控网格蛋白的表达影响细胞的吞噬过程，我们的研究结果增加了对miRNA吞噬调控机制和途径的认识。随着对miR-1调控机制的研究深入，我们将在整个生物系统、网络层面综合理解miR-1的功能。RNAi是由双链RNA(dsRNA)引发的一种特异性基因沉默现象，尤其在无脊椎动物中，RNAi是一种

3、重要的抗病毒机制，并有研究表明RNAi在对虾体内具有抗病毒效果。dsRNA经Dicer裂解产生21bp的双链siRNA，siRNA作为核心指导者和ago蛋白以及一些辅助蛋白通过一系列复杂的过程参与RISC(RNAinducedsilencingcomplex)的形成。RISC装配是一个复杂精细的过程，参与其中的蛋白除了ago之外，还有dsRNA结合蛋白等辅助蛋白参与完成，然而这些研究尚不清楚。vp28．siRNA是21bp的双链siRNA，靶向对虾白斑综合症病毒的膜蛋白编码基因vp28。本研究在海洋生物对虾

4、中利用生物素链霉素亲和系统筛选到vp28．siRNA互作蛋白精氨酸激酶，经westernblot和RNA免疫共沉淀表明siRNA确与精氨酸激酶存在互作。该部分试验探究为进一步阐明无脊椎动物中siRNA介导的RNAi的作用机制，同时为RNAi抗病毒的研究提供参考。关键词：对虾，miRNAs，吞噬，siRNA，argininekinase浙江大学硕士论文摘要AbstractMicroRNAsareaclassofendogenousnon-codingRNAswith20～24nt，whichhasbeenwi

5、delyconfmnedtobeinvolvedinmostbiologicalprocesses，includingcelldevelopment，celldifferentiation,metabolismandtumorigenesis．TocharacterizethemiRNAsrelatedtophagocytosisinMarsupenaeusjaponicusshrimp，thecytochalasinBwasinjectedintoshrimpinthisstudy．BymiRNAsdee

6、psequencinganalysis，atotalof21miRNAsinvolvedinphagocytosisregulationofshrimpwereobtained．AmongthemiRNAsinvolvedinphagocytosis，miR-1WasaconservedmiRNAfrominvertebratestomammals．TheresultsshowedthatthemiR-1couldregulatephagocytosisinshrimpandRAW264．7macropha

7、ge．OurdataindicatedthatthemiR-1playedacrucialroleduringphagocytosisbytargetingclathrinheavychain．OurstudywouldbeveryhelpfultorevealtheregulatorymechanismmediatedbymiRNAinphagocytosis．RNAiisagene-silencingprocesstriggeredbydouble-strandedRNAs(dsRNAs)，whichC

8、ancausethecleavageofhomologousmRNA．InRNAi，theshortinterferingRNAs(siRN触)，~2l之5ntdouble—strandedfragments，serveasthecoremediatorsofRNAiandaleproducedfromdsRNAsbyDicenThesiRNAsaccompaniedwiththeargonautefamilyp