小鼠大脑中动脉梗死模型VERGE蛋白表达的变化及其机制

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1、小鼠大脑中动脉梗死模型VERGE蛋白表达的变化及其机制作者：王赞姜宏宇纪莉林卫红【摘要】目的探讨VERGE蛋白在小鼠大脑中动脉梗死模型(MCAO)中蛋白表达的变化及其机制。方法C57BL/6小鼠30只，随机分为2组：30minMCAO模型组、90minMCAO模型组，制备MCAO模型，应用激光多普勒血流仪进行术中脑血流监测，应用Western印迹法观察各组梗死侧及非梗死侧的VERGE、pJNK2、pERK1/2、P38蛋白表达的变化。结果30min、90minMCAO模型组梗死侧VERGE、pJNK2的蛋白表达明显增高，pERK1/2、P38蛋白表达无变化;两组M

2、CAO模型非梗死侧的VERGE、pJNK2、pERK1/2、P38蛋白表达均无变化。结论VERGE蛋白表达在小鼠MCAO的早期明显升高可能与JNK2通路有关而与ERK、P38通路无关。【关键词】VERGE;大脑中动脉梗死;机制　　【Abstract】ObjectiveTostudytheproteinexpressionanditsmechanismofVERGEinMCAOmicemodels.MethodsThemiceweredividedinto30and90minMCAOgroups.AllmiceweremadeintoMCAOmodels.Theprote

3、inexpressionsofVERGE,pJNK2,pERK1/2,P38weretestedbyWesternblot.ResultsTheprotein7expressionsofVERGE,pJNK2ofbothgroupsinischemiahemispherewereincreased,whiletheproteinexpressionsofpERK1/2,P38hadnochange.TherewerenoproteinexpressionchangesofVERGE,pJNK2,pERK1/2,P38inthenonischemichemis

4、phereofbothgroups.ConclusionsTheproteinexpressionofVERGEisincreasedinthetransientMCAOmodels,themechanismsofwhichmayberelatedtoJNK2.　　【Keywords】VERGE;Middlecerebralarteryocclusion(MCAO);Mechanism　　血管早期反应基因(VERGE)可以快速、选择性地表达在成熟脑的血管内皮细胞，与血管的形成及发展密切相关，可以作为一种即早基因调控〔1〕。VERGEE编码一个73个氨基酸的区域与Apol有30

5、%的同源性，在缺血缺氧时迅速爆发，通过PKC引起MAPK蛋白表达的变化，但其细胞信号传导的机制尚不完全清楚。本研究拟建立小鼠大脑中动脉梗死(MCAO)模型，观察VERGE及pJNK2、pERK1/2、P38蛋白表达的变化，进一步明确脑缺血后VERGE表达变化及其信号传导的通路。　　1材料与方法7　　1.1动物及分组实验过程按照瑞士政府实验动物保护条例进行，C57BL/6小鼠为苏黎世大学附属医院动物室提供。共分2组：30minMCAO组;90minMCAO组,每组10只。A组为30minMCAO模型非梗死侧;B组为30minMCAO模型梗死侧;C组为90minMCAO模型

6、非梗死侧;D组为90minMCAO模型脑梗死侧。　　1.2VERGE由JeanB博士赠给Dirk.M.Hermann教授。　　1.3小鼠MCAO模型制备〔2〕各组大鼠采用1%Isoflorin气体麻醉,应用恒温仪使直肠温度保持在37℃，分离结扎左侧颈总动脉和颈外动脉，将带有硅胶的8.0尼龙线从颈总动脉插入颈内动脉，长度为9mm，阻断大脑中动脉血流，A、B组在30min将尼龙线撤出,C、D组90min将尼龙线撤出，进行再灌注。　　1.4激光多普勒血流仪(LDF)监测在实验过程中脑血流用0.5mm光纤探头进行监测，右大脑中动脉区位置为囟门旁开6mm，后2mm，只有LDF的血流值降

7、低到15%～20%，再灌注血流恢复到50%左右为梗死再灌注模型成功。　　1.5Western印迹分析将两组梗死侧及非梗死侧脑组织分别进行Actin、VERGE、pJNK2、pERK1/2、P38的Western印迹分析，组织冰冻切片，应用裂解液裂解,取上清液用于SDS7PAGE,等量蛋白被溶于6×SDS缓冲液，煮沸，并载入15%多丙烯胶，蛋白被转移到PDF膜上，浸在鼠抗Actin、一抗多克隆抗VERGE、pJNK2、pERK1/2、P38中过夜干燥，膜再浸在驴抗羊或羊抗兔二抗中，洗脱后，浸