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《大鼠脑梗死模型中载脂蛋白j mrna表达的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、大鼠脑梗死模型中载脂蛋白JmRNA表达的研究【摘要】目的探讨载脂蛋白J(ApoJ)在大鼠脑梗死急性期的作用及其机制。方法清洁级SD雄性成年大鼠70只,随机分为正常对照组、假手术组、脑梗死后6h组、24h组、3d组、5d组和7d组。用线栓法制备永久性局灶性脑梗死模型,动物处死后检测ApoJ及补体C3mRNA的表达值。结果各模型组手术侧ApoJmRNA表达和C3mRNA表达水平均高于正常对照组及假手术组(P<0.01),C3的表达从脑缺血后6h起高于对照组,而ApoJ在缺血后24h才出现表达增强。ApoJmRNA表达值与补体C3mRNA表
2、达水平呈正相关(r=0.427,P<0.01)。结论大鼠脑梗死后补体C3激活,ApoJ的表达代偿性增高,以抑制补体的活性,从而抑制补体介导的神经元死亡,起神经元保护的作用。【关键词】载脂蛋白J;补体C3;脑梗死 Abstract：ObjectiveToinvestigatethemechanismoftheneuroprotectiveeffectofApoJinratacutecerbralinfarction.Methods70healthymaleSDratslyintonormalcontrolgroup,shamopera
3、tedgroup,cerebralinfarction6hourgroup,24hourgroup,3daygroup,5daygroupand7daygroup.Permanentcerebralinfarctionmodelsiddlecerebralartery(MCA)usingthreadembolizing，theC3andApoJmRNAexpressioniaratbrainandaloRNAalratbrain,apositivecorrelationfoundbetRNAandApoJmRNAexpression(r=0
4、.427，P<0.01).ConclusionsIncreasedApoJexpressionmaybeinvovedinneuroprotectionincerebralinfarctionbyinhibitingtheplementactivation. KeyentponentC3;cerebralinfarction 载脂蛋白J(ApolipoproteinJ,ApoJ)是Desilva等人从血清中分离提纯出一种新的酸性糖蛋白，可与脂质结合成脂蛋白，存在于血浆中[1]。ApoJ在人体不同组织和体液中广泛存在,在脑中浓度最高
5、;有研究表明ApoJ具有结合和转运脂质、抑制补体活化及保护细胞膜等功能[2]。ApoJ在许多病理过程中有所表达,许多神经系统疾病ApoJ的表达均显著增高。本文拟对大鼠脑梗死模型脑内的ApoJ表达及可能的作用机制进行研究。 1材料与方法 1.1实验动物及分组 清洁级雄性SD大鼠70只,体重60～120g,鼠龄3～4个月,随机分为正常对照组、假手术组、脑梗死后6h组、24h组、3d组、5d组、7d组,每组10只。 1.2检测指标 用RT-PCR方法检测ApoJmRNA及补体C3mRNA表达值,以补体C3mRNA表达值作为补体激活的评价
6、指标。 1.3实验方法 1.3.1脑梗死模型制备 用线栓法制备永久性脑梗死模型,出现局灶性神经功能缺损者为模型制备成功,无神经功能缺损但经TTC染色(盐酸2，3，52三苯基四氮唑)证实脑组织内有梗死灶存在者仍视为模型制备成功。 1.3.2半定量RT-PCR法检测ApoJmRNA及C3mRNA表达 分别取双侧脑组织匀浆,用一步法总RNA提取试剂盒提取总RNA;用逆转录试剂盒以总RNA为模板合成CDNA;将cDNA在PTC220型PCR热循环仪上进行扩增:ApoJ引物序列为TACAGTTCCCGGATGTGGAT,CACGAGAGGG
7、GACTTCTGAG,反应条件为95℃5min,[95℃60s,-60℃60s,-72℃60s]×28,-72℃7min;C3引物序列为GACCTGCGACTGCCCTACTCT,CTGATGAAGTGGTTGAAGACGG,反应条件为95℃5min,[95℃60s,-58℃60s,-72℃60s]×30,72℃7min;β-actin引物序列为GTAGCCATCCAGGCTGTGTT,CAGTGAGGCCAGGATAGAGC(用计算机设计,Locus:actx,Accession:NM-031144)。内对照β-actin与目的基因Apo
8、J及C3分别在同一反应体系中同时扩增。将ApoJ与补体C3的PCR产物在琼脂糖凝胶上电泳,在EagleEyeⅡ型图像处理系统上测量ApoJ及C3电泳带的光密度,用β-actin作
