小鼠哮喘模型肺组织中stat1活性变化及其对icam1表达的影响

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1、小鼠哮喘模型肺组织中STAT1活性变化及其对ICAM1表达的影响【摘要】目的探讨信号转导和转录激活子1（signaltransducersandactivatorsoftranscription1,STAT1）DNA结合活性在小鼠哮喘模型的肺组织中不同时间点的变化及其对细胞间黏附分子1（intercellularadhesionmolecule1,ICAM1）表达的调控作用。方法用鸡卵白蛋白(OVA)抗原溶液腹腔注射致敏,雾化吸入激发制备哮喘小鼠模型，造模后凝胶迁移滞留试验（EMSA）的方法测定病变肺组织中STAT1DNA结合活性在

2、模型组不同时间点(8h、24h、48h、96h、7d)的变化；PCR法测定ICAM1mRNA在上述时间点的表达，设生理盐水对照组。设生理盐水对照组为0h时间组。结果造模后肺STAT1明显活化，96h达到最高峰；ICAM1mRNA与蛋白表达在8h开始有所增加，96h达高峰。STAT1DNA结合活性及ICAM1表达呈高度正相关。对照组则无明显改变。结论哮喘模型的病变肺组织STAT1DNA结合活性的持续与异常升高，STAT1参与鸡卵白蛋白诱导的小鼠哮喘的发生和发展；ICAM1在模型的不同时间点表达增加，可能受到STAT1调控。【关键词】小

3、鼠鸡卵白蛋白哮喘动物模型转录黏附分子　　Abstract:ObjectiveTodetectthechangeofDNAbindingactivityofSTAT1invarioustimeandexpressionofintercellularadhesionmolecule1icemodelobilityshiftassay(EMSA)andPCR.MethodsMiceizedintodifferentgroups:asthmagroupandnormalcontrolgroup.Miceinmodelgroupalsin.The

4、modelsobilityshiftassays(EMSA)atvarioustimepoints.ExpressionofICAM1iccurveinexperimentalgroups.Itbegantoincreaseat8hpointtimeandreachedtopeakat96h,thendecreasedbutstillkeepobviouslyhigherat7dversuscontrolgroup(P<0.01).LevelsofICAM1mRNAsignificantlyelevatedat8handthepe

5、akportantfactorthatmaybeinvolvedinacuteandchronicinflammationdevelopment.STAT1alsoregulatedICAM1expressionduringasthma.　　Keyice;OVA;asthma;animalmodel;transcription;intercellularadhesionmolecule　　支气管哮喘(bronchialasthma,BA)是一种气道非特异性炎症性疾病,在我国发病率比较高，严重影响患者的身心健康和生活质量，给社会及家庭造成了

6、严重的经济负担。随着研究的深入，细胞信号转导途径对哮喘的作用越来越受重视，特别是信号转导和转录激活子1（signaltransducersandactivatorsoftranscription1,STAT1），成为揭示哮喘发病机制的一个新的途径。STAT1是连接多种细胞膜受体与选择性效应器之间信号转导的主要蛋白质，在细胞因子调节网络中起着重要作用。本文旨在通过建立小鼠的哮喘模型，研究STAT1在哮喘发病过程中对ICAM1基因的转录调节作用，有助于从基因转录调节的水平寻找哮喘治疗的新靶点。　　1材料与方法　　1．1实验方法　　1.1.1实

7、验动物分组36只6周BALA/C小鼠，购自广东医学院动物实验中心，体质量10～14g，合格证号：2005A025。按随机区组设计随机分为6组：生理盐水组（6只），模型组(造模后8h,24h,48h,96h,7d5个时间点处死，各6只)。实验方法：第1日每只小鼠腹腔注射20μg卵白蛋白(OVA)和2mg氢氧化铝〔混合于0.15mL磷酸盐缓冲液(PBS)中〕；第8天注射10μgOVA和1mg氢氧化铝。第15天开始将小鼠置于封闭容器中，给予5%OVA和0.5×PBS雾化吸入激发哮喘发作；均每日1次，每次25min，连续7d；造模成功后，按上述时间

8、点处死动物。标本处理：造模后放血处死小鼠，从每时间点组迅速取出肺组织，小部分作HE病理分析，其余部分液氮-70℃冷冻保存留待EMSA分析STAT1，RTPCR分析ICAM1m