小鼠哮喘模型肺组织中stat1活性变化及其对icam1表达的影响论文

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1、小鼠哮喘模型肺组织中STAT1活性变化及其对ICAM1表达的影响论文【摘要】目的探讨信号转导和转录激活子1（signaltransducersandactivatorsoftranscription1,STAT1）DNA结合活性在小鼠哮喘模型的肺组织中不同时间点的变化及其对细胞间黏附分子1（intercellularadhesionmolecule1,ICAM1）表达的调控作用。方法用鸡卵白蛋白(OVA)抗原溶液腹腔注射致敏,雾化吸入激发制备哮喘小鼠模型，造模后凝胶迁移滞留试验（EMSA）的方法测定病变肺组织中STAT1DNA结合活性在模型组不同时间点(8h、24h、48h、96h、7

2、d)的变化；PCR法测定ICAM1mRNA在上述时间点的表达，设生理盐水对照组。设生理盐水对照组为0h时间组。结果造模后肺STAT1明显活化，96h达到最高峰；ICAM1mRNA与蛋白表达在8h开始有所增加，96h达高峰。STAT1DNA结合活性及ICAM1表达呈高度正相关。对照组则无明显改变。结论哮喘模型的病变肺组织STAT1DNA结合活性的持续与异常升高，STAT1参与鸡卵白蛋白诱导的小鼠哮喘的发生和发展；ICAM1在模型的不同时间点表达增加，可能受到STAT1调控。【关键词】小鼠鸡卵白蛋白哮喘动物模型转录黏附分子Abstract:ObjectiveTodetectthechang

3、eofDNAbindingactivityofSTAT1invarioustimeandexpressionofintercellularadhesionmolecule1icemodelobilityshiftassay(EMSA)andPCR.MethodsMiceizedintodifferentgroups:asthmagroupandnormalcontrolgroup.Miceinmodelgroupalsin.Themodelsobilityshiftassays(EMSA)atvarioustimepoints.ExpressionofICAM1iccurveinexpe

4、rimentalgroups.Itbegantoincreaseat8hpointtimeandreachedtopeakat96h,.freelRNAsignificantlyelevatedat8handthepeakportantfactorthatmaybeinvolvedinacuteandchronicinflammationdevelopment.STAT1alsoregulatedICAM1expressionduringasthma.Keyice;OVA;asthma;animalmodel;transcription;intercellularadhesionmolecu

5、le支气管哮喘(bronchialasthma,BA)是一种气道非特异性炎症性疾病,在我国发病率比较高，严重影响患者的身心健康和生活质量.freelg氢氧化铝〔混合于0.15mL磷酸盐缓冲液(PBS)中〕；第8天注射10μgOVA和1mg氢氧化铝。第15天开始将小鼠置于封闭容器中，给予5%OVA和0.5×PBS雾化吸入激发哮喘发作；均每日1次，每次25min，连续7d；造模成功后，按上述时间点处死动物。标本处理：造模后放血处死小鼠，从每时间点组迅速取出肺组织，小部分作HE病理分析，其余部分液氮-70℃冷冻保存留待EMSA分析STAT1，RTPCR分析ICAM1mRNA表达。1.1.2凝胶迁

6、移滞留试验（EMSA）检测肺组织STAT1核蛋白的提取从液氮中取出肺组织，隔铝箔纸捣碎。裂解缓冲A液（10mmol/LHEPESKOH，1.5mol/LMgCl2，10mmol/LKCl，1mmol/LPMSF，1mmol/LDTT10μg/mLLeupeptin，35μg/mLAprotinin）312μL溶解粉末，0℃匀浆10～20次。0℃，2000r/min，离心15s。弃沉淀，保留上清液冰浴5min。0℃，5000r/min，离心10s。保留沉淀用裂解缓冲B液（20mmol/LHEPESKOH，25%Glycerol，420mmol/LNaCl，1.5mmol/LMgCl2，1mm

7、ol/LPMSF，1mmol/LDTT，10μg/mLLeupeptin，35μg/mLPepstatin，10μg/mLAprotinin）104μL重悬，冰浴2min。0℃，12000g，离心15min。保留上清液，取1μL用考马斯亮蓝染色法测定核蛋白浓度。其余上清液分装，-70℃保存备用。凝胶迁移率变动电泳分析法（EMSA）具体步骤